Метод ускоренной постановки биологической пробы на морских свинках в диагностике туберкулеза животных

2
СОДЕРЖАНИЕ
стр.
ВВЕДЕНИЕ ......................................................... 4
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ............................................... 8
1.1. Методы диагностики туберкулеза животных...................... 8
1.2. Бактериологическая диагностика туберкулеза...................10
1.2.1. Бактериоскопический метод..................................12
1.2.2. Культивирование микобактерий на питательных средах.........15
1.2.3. Биологическая проба на лабораторных животных............... 29
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ....................................... 33
Материал и методы исследований................................. 33
2.1. Разработка ускоренной постановки биологической пробы на морских свинках в диагностике і7беркулеза животных на основе феномена Коха............................................................. 35
2.1.1. Теоретическое обоснование................................. 35
2.1.2. Сравнительная эффективность подкожного и интратестикулярно-
го методов заражения морских свинок......................... 38
2.1.3. Легальная доза ППД туберкулина для млекопитающих при внут-ірибрюшинном введении здоровым морским свинкам................... 45
2.1.4. Летальная доза ППД туберкулина для млекопитающих при внут-
рибрюшинном введении морским свинкам, зараженным М. bovis ... 49
2.1.5. Оптимальный срок внутрибрюшинного введения ГІГ1Д туберкулина для млекопитающих, вызывающий гибель зараженных М. bovis морских свинок................................................... 56
2.1.6. Летальность морских свинок в зависимости от дозы заражения М. bovis после внутрибрюшинного введения ППД туберкулина
для млекопитающих............................................ 60
з
2.2. Методика ускоренной постановки биологической пробы на туберкулез ............................................ 63
2.3. Эффективность ускоренной постановки биологической пробы на морских свинках в диагностике туберкулеза животных. 66
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ............... 71
4. ВЫВОДЫ............................................ 76
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.......................... 78
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ................................. 79
7. ПРИЛОЖЕНИЕ....................................... 104
9
лейкоцитов (РБТЛ), реакция торможения миграции клеток (Е.А. Суворов, 1968; Н.П. Овдиенко и др., 1980; М.В. Харитонов, 1983; Г.А. Попова, 1985; Е.И. Буряк, 1987; А.П. Лысенко, 1987; F. Griffini, 1988).
С этой целью предложены также специфические компоненты, выделенные из стандартного туберкулина (Б.Н. Шакенов с соавт., 1989, 1990), симультанная проба с ППД-туберкулином для млекопитающих и комплексным аллергеном из атипичных микобактерий - KAM (All. Шаров, 1980) или туберкулином для птиц (И.И. Румачик, 1995), реакция агглютинации латекса (З.Г. Воробьева и др., 1995), ультразвуковой соникат из М. bovis в иммуноферментном анализе (И.П. Фоминов, 1996).
В качестве дополнительных диагностических тестов при туберкулезе, кроме того, предложены гематологические исследования (Г\Ф. Коромыслов, Э.С. Га-зарх, 1967), сенситины (С.Д. Басыбеков, 1977), градуированная туберкулиновая проба (Н.И. Ложин, 1964; Н.М. Чурбаков, 1967; Д.Д. Новак, 1977; Р. Poplunar et al., 1972), надплевральная новокаиновая блокада и аллергическая проба с жидкостью эхинококкового пузыря (В.М. Харитонов и др., 1982; Н.З. Хазипов с соавт., 1985), СКЖ-туберкулин (К.А. Тургенбасв и др., 2001).
Достижения зарубежной и отечественной науки в области биотехнологии открыли перспективы создания нового поколения диагностикумов при туберкулезе с высокой чувствительностью и специфичностью. Наибольшее признание получили метод иммуноферментного анализа - ИФА (Y. Morris, С. Thorn, 1985; P.A. Хамзин и др., 1985; А.А. Нуррулин, 1986; Е. Маслов с соавт., 1986; М.В. Андросова, 1987, 1989; Л.М. Ходун, 1988; Л.М. Ходун, Н.И. Цунская, 1989, 1990; Н.И. Цунская, Л.Т. Аппельганц, 1991; Н.П. Овдиенко с соавт., 2001;
O.A. Верховский и др., 2001; полимеразно-цепной реакции - 11ЦР (Н.П. Овдиенко с соавт., 2001; А.Н. Шаров и др., 2001), хемилюминссцентного анализа (Ю.В. Мартынов, Л.М. Ходун, 1989; Л.М. Ходун, Ю.В. Мартынов, 1991; Г.М. Дюсенова, Л.А. Тштлер, 2001).
10
Таким образом, для диагностики туберкулеза животных предложено много диагностических тестов, однако большинство из них не внедрено в широкую производственную практику ввиду низкой эффективности, необъективности результатов или сложности применения.
1.2. Бактериологическая диагностика туберкулеза
Основными методами первичной диагностики туберкулеза сельскохозяйственных животных являются патологоанатомический и бактериологический, результаты которых предопределяют окончательный эпизоотический статус хозяйства (фермы, стада). Заболевание туберкулезом считается установленным, если диагноз подтверждается данными патологоанатомических исследований внутренних органов и лимфатических узлов, а при отсутствии характерных для туберкулеза видимых изменений - положительными результатами бактериологического исследования биологического материала.
Основы бакгериологической диагностики туберкулеза разработаны еще в 30-50 годы в медицине. В дальнейшем эти методы стали широко использовать в ветеринарной бакгериологической практике, но с тех пор они не претерпели существенных изменений.
Разработаны методы выделения микобактерий из биоматериала с помощью детергентов или ультразвука (Б.Я. Циммер, 1984), однако они оказались экономически невыгодны, так как требуют большого количества дорогостоящих реактивов и специальной аппаратуры (A.C. Донченко с соавт., 1988).
В соответствии с нормативно-законодательными положениями при туберкулезе животных для первичной постановки диагноза необходимо выявить специфические туберкулезные изменения в органах и тканях убитых с диагностической целью животных, реагирующих на туберкулин, или выделить культуру возбудителя туберкулеза бычьего или человеческого вида. Таким образом,