Разработка инактивированной эмульсионной вакцины против пастереллёза рогатого скота, лошадей и свиней

2
ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение...............................................................6
1. Обзор литературы...................................................10
1.1. Пастсрсллёзы сельскохозяйственных животных....................10
1.2. Бактериальные вакцины.........................................12
1.3. Изготовление противопастереллёзных вакцин.....................16
1.4. Основные методы контроля качества инактивированных бактериальных вакцин................................................................21
1.5. Заключение по обзору литературы...............................29
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ...........................................30
2.1. Материалы...................................................... 30
2.1.1. Штаммы микроорганизмов......................................30
2.1.2. Питательные среды...........................................30
2.1.3. Подопытные животные.........................................30
2.1.4. Бактериологические краски..................................З 1
2.1.5. Растворы и реактивы.........................................31
2.1.6. Оборудование................................................32
2.2. Мегомы...........................................................33
2.2.1. Методы изучения биологических свойств пастерелл.............33
2.2.2. Определение количества живых микробных клеток...............34
2.2.3. Световая микроскопия........................................35
2.2.4. Определение реактогенности масляного адъюванта..............35
2.2.5. Изготовление опытных образцов вакцины.......................35
2.2.6. Определение физических и иммунобиологических свойств опытных образцов вакцины......................................................36
2.2.7. Статистическая обработка результатов........................38
3. Результаты собственных исследований................................38
3.1. Основные биологические свойства контрольно - производственных
штаммов пастерелл.....................................................38
3.2. Подбор режима глубинного культивирования пастерелл............43
з
3.3. Изучение инактивации Р.тиКосіба и Р.ІшетоІуііеа
аминоэтилэтиленимином и формалином......................................................45
3.4. Изготовление опытных образцов вакцины против пастереллёза рогатого скота, лошадей и свиней и изучение их физических и иммунобиологических свойств.................................................................................48
3.4.1. Физические свойства опытных образцов вакцины..................................48
3.4.2. Иммунобиологические свойства опытных образцов вакцины.........................50
3.4.2.1. Безвредность................................................................50
3.4.2.2. Реактогенность..............................................................52
3.4.2.3. Изучение антигенных и иммуногенных свойств вакцины на
лабораторных животных...................................................................53
3.4.2.4. Изучение антигенных и иммуногенных свойств вакцины на
овцах..................................................................55
3.4.2.5. Изучение антигенных и иммуногенных свойств вакцины на
свиньях................................................................58
3.4.2.6. Изучение антигенных и иммуногенных свойств вакцины на крупном рогатом скоте...........................................................................60
3.5. Изготовление экспериментальных серий вакцины против пастереллёза
рогатого скота, лошадей и свиней инактивированной эмульсионной............................................................................63
3.6. Контроль качества вакцины.......................................................64
3.6.1. Определение основных физических и иммунобиологических свойств
экспериментальных серий вакцины.........................................................66
3.7. Определение активности антигенов Р.шіійосісіа п ІМиїетоІуІіса в сосі пне вакцины в процессе её храпения..........................................................67
3.8. Изучение эффективности применения вакцины против пастереллёза рогатого скота, лошадей и свиней в условиях
хозяйств.............................................................................. 68
4. Обсуждение результатов исследований..................................................69
5. Выводы...............................................................................75
6. Практические предложения.............................................................76
7. Список использованной литературы.....................................................77
Приложения.............................................................96
10
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Пастереллёзы сельскохозяйственных животных
1 Іистсрсллсзм относятся к числу наиболее широко распространенных инфекционных заболеваний животных, регистрируемых во многих странах мира (10, 18, 23, 25, 30, 36, 63, 81, 87).
Экономический ущерб от болезни слагается из потерь ог падежа, вынужденного убоя больных животных и затрат на проведение профилактических и оздоровительных мероприятий.
Инфекционная природа болезни установлена в конце 19 века, а возбудитель впервые выращен на искусственных питательных средах в 1880 г великим французским ученым Луи Пастером, в честь которого в 1910 г данный микроорганизм назвали пастереллой.
Согласно определителя бактерий Берджи (57) в семейство Pasleurellaceae входит три рода - Pasteurella, Haemophilus и Actinobacillus. Род Pastcurclla включает 15 видов, два из которых: P.multocida и P.haemolytica являются возбудителями пастереллёзов животных. В свою очередь вид P.multocida подразделяется на 3 подвида: P.multocida subspecies multocida, P.multocida subspecies septica, P.multocida subspecies galicida, различающихся между собой по биохимическим свойствам (57, 58). В настоящее время рядом
исследователей предлагается исключить вид P.haemolytica из рода Pasteurella и обозначить его Mannheimia haemolytica.
Согласно 'классификации Carter - Hcddleston (98, 129) все штаммы P.multocida, циркулирующие в природе, подразделяют на 5 серогрупп по капсульному антигену, обозначаемых латинскими буквами А, В, D, Е, F и 16 сероваров по соматическому антигену (97, 98, 99).
Суммируя данные о распространении серовариантов пастерелл и их этиологической роли при различных формах пастереллёза, многие исследователи сходятся во мнении, что серовары В:2, В:5 и Н:2 являются возбудителями геморрагической септицемии у сельскохозяйственных и диких
11
животных (25, 87, 91, 99, 107, 110, 160). При легочной форме пастереллёза, к которой наиболее чувствителен молодняк, особенно часто изолируют штаммы РлпиИоаба, типируемые как сероварианты А:1, А:3, А:12 (18, 63, 73, 80, 82). Штаммы серологических вариантов Д:1, Д:3, Д:4 являются основным этиологическим агентом в развитии инфекционного атрофического ринита свиней (80, 93, 95, 103, 117, 162, 173) и хронических процессов органов дыхания у многих видов животных. Сероварианты А: 1, А:3, А:4 Р.тийоЫйа вызывают холеру домашней и дикой птицы (9, 72, 115).
Различные серовары Р.Ьаето^йса, биотип А, вызывают фибринозную плевропневмонию в тяжелой форме у крупного рогатого скота и овец, иногда септицемию у ягнят и мастит у овец. Некоторые серовары Р.Иаето1упса, биотип Т, также вызывают септицемию у ягнят (57, 81, 82, 102).
В настоящее время достаточно хорошо изучены морфологические, культуральные, биохимические и патогенные свойства пастерелл. Полагают, что пастереллы убиквитарны и паразитируют на многих видах домашних и диких животных, при этом взаимоотношения паразита и хозяина часто сглажены и проявляются бессимптомным бактерионосительством.
Наиболее широко распространено бактерионосительство среди крупного рогатого скота (9,5%), домашних птиц (4,95%). В среднем носители выявлены среди здоровых животных и птиц в 3,9%, среди больных с респираторным синдромом - в 4,6% случаев (83).
Локализуются пастереллы у носителей преимущественно в носовых ходах, трахее, легких. Длительность носительства колеблется от нескольких месяцев до года, возможно и более продолжительное время. Пасгереллоносительство является причиной возникновения спонтанных вспышек инфекции, возникающих при ослаблении организма носителей под воздействием различного рода неблагоприятных факторов (резкие температурные колебания, перегоны и перевозки животных, изменения условий их содержания и т.д.).