Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте птицеводства, в птицеводческих хозяйствах Российской Федерации, Грузинском биокомбинате, на Ставропольской, Сумской и Курской биофабриках
Научный консультант:
Академик РАСХН, доктор ветеринарных наук, профессор Коровин Рудольф Николаевич
Официальные оппоненты:
- доктор ветеринарных наук, профессор Кузьмин Владимир Александрович
- доктор ветеринарных наук, профессор Лагуткин Николай Алексеевич
- доктор биологических наук Смоленский Владимир Иванович
Ведущее учрежде ж і ветеринар-
ной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина.
Защита диссертации состо Санкт-Петербургской Госудат Диссертационном Совете Д Петербург, ул. Черниговская,
" часов в
ТИЦИНЫ в
, Санкт-
С диссертацией в форме вау* ке Санкт-Петербургской Го суда}
иблиоте-
шины.
Диссертация разослана" Ь ‘
Ученый секретарь Диссертационного Совета
АВ.Н.
1. Общая характеристика работы.
1.1. Актуальность проблемы. Важной составляющей экономики птицеводческих предприятий является обеспечение устойчивости птицы к инфекционным заболеваниям и ветеринарное благополучие хозяйств. Недостаточное внимание к профилактике болезней и бессистемный завоз племенной птицы из различных хозяйств и особенно из-за рубежа привели к тому, что в ряде регионов России участились случаи проявления таких опасньтх вирусных болезней как инфекционный ларинготрахеит, рсовирусныс инфекции, вирусный энтерит гусей, инфекционный бронхит. Получили распространение новые вирулентные и супервирулеипше варианты ряда возбудителей инфекционной бурсальной болезни, болезни Марека и другие.
В комплексе мероприятий по прелупреждению и ликвидации вирусных болезней птиц важная роль отведена специфической профилактике. Однако в ряде случаев вакцинные препараты не удовлетворяют практических специалистов по эффективности, способам применения, остаточной рсактогснносги и ряду других показателей. Характерна в этом отношении ситуация, сложившаяся в области специфической профилактики инфекционного ларинготрахеита (ИЛТ).
Заболевание характеризуется высокой конгагиозностью, выраженной тенденцией к стационарности в силу биологических особенностей возбудителя, что осложняет проведение оздоровительных мероприятий и обуславливает крайнюю необходимость создания эффективных методов диагностики и средств специфической профилактики (Малушко В.В., Трефнлов Б.Б., 1983; Малушко В.В., 1985).
Применяемые вакцины из штаммов "ЦНИИЛП", "НТ" и "О" не приносят желаемого успеха, поскольку не обеспечивают достаточного уровня иммунитета у вакцинированной птицы в условиях эпизоотической нестабильности и неблагополучия птицехозяйств. Это, видимо, свидетельствует о генетической нестабильности и неоднородности названных вакцинных штаммов вируса
Исходя из изложенного, разработка высокоэффективной и технологичной вакцины против ИЛТ, применяемой в условиях промышленного птицеводства являлась актуальной задачей.
Серьезным препятствием на пути развития промышленного гусеводства наряду с факторами нарушения технологического режима выращивания пгтицы, являются инфекционные заболевания молодняка среди которых особое место занимает вирусный энтерит гусей (ВЭГ) (Контримавичус Л.М., 1971, 1983; Малушко В.В., 1982). Заболевание имеет широкое распространение среди молодняка 1-30-сут возраста протекает остро и характеризуется высохой смертностью птицы (до 100%).
Изучение ВЭГ, начатое в середине 60-х годов, проводится во многих странах мира ГКонтимяшпп«- п кл /*— ,п" ггелина Е.А.,
1987; Рагёи-
смертность едостаточно аны. с іе эффектив-
вируснахшша ВНИВИП против РТ, технология ее промышленного производства, методы и схема применения;
инактивированная вакцина против РТ, технология ее опьпно-промышленного изготовления, методы применения;
внедрение вакцин против ИЛТ, ВЭГ и РТ в ветеринарную практику.
1.8. Объем и структура научного доклада. Научный доклад изложен на 43 страницах, содержит 5__ таблиц и включает следующие разделы: "Общая характеристика
работы", "Материалы и методы", "Результаты исследований", "Выводы", "Практические предложения", "Список работ, опубликованных по теме диссертационного доклада".
2. Материалы и методы.
Работа выполнена в 1970-2000 гг. в отделе вирусологии Всесоюзного научно-исследовательского ветеринарного института птицеводства (с 1991 г. Всероссийский) в юответствии с общесоюзной и отраслевой научно-технической программами НИР, на Габахмельском биокомбинате. Ставропольской и Сумской биофабриках, а также в пти-дехозяйствах системы "Птицепром" различных республик и областей страны. Соиспол-нпелями отдельных фрагментов работы были сотрудники других лабораторий ВНИВИП - патоморфологии и электронной микроскопии, биохимии и иммунологии, аэрозолей и фармакологии, радиобиологии.*
• За указанный период проведены полевые испытания разработанных препаратов на 25 ггииефабриках яичного и мясного направлений, в 24 гусеводческих хозяйствах, ИПС и [юрмах различных географических зон страны. Схема эпизоотологимсского обслслова-1ия хозяйств разработана во Всесоюзном НИВИ птицеводства. В каждом хозяйстве ана-!Нзировали эпизоотическую ситуацию, выясняли условия, способствующие распространите и развитию возбудителей, определяли источники инфекции, оценивали условия одержания, кормления птиц и другие показатели.
В процессе выполнения работы были использованы следующие биологические модс-и: куриные и гусиные эмбрионы, цыплята и гусята разных возрастов и пород, куры, етухи, гуси; лабораторные животные (новорожденные мыши массой 6-7 г, белые мыши сосунки, морские свинки массой 250-300 г. кролики породы Шиншилла массой 2,5-3 г); первично-трипсинизированныс культуры клеток - фибробласты эмбрионов кур 1>ЭК), клетки почек эмбрионов гусей (ПЭГ) и перевиваемые линии клеток института итологии (г. Ленинград): Ь, Нега, Уего, ВОМ, ВНК-21, Нср-2.
Для изучения антигенных взаимоотношений эталонных штаммов и вирусных изоля-зв использовали штаммспецифичесхие пшериммунные сыворотки, полученные против зпытуемых штаммов вирусов на кроликах, курах, гусях, козах, а также референс-лворотки и штаммы ВЭГ, производства ГДР. ВНР и ВИЭВ.
ч соисполнители отдельных фрагментов работы: Колабская Л.С.. Соколов В.Д., Сева-ьянов Г.А., Мишин B.C.
7
Реакцию нейтрализации (PH) ставили в а- и ß-вариантах стандартными классически ми методами, описанными в руководстве по вирусологии (Сюрин В.Н., 1966), а при из) чении внутритиповых антигенных различий штаммов вирусов использовали метод Gar S. (1957), основанный на выявлении разницы в титрах при нейтрализации шга-ммспсик фичсской сывороткой гомологичного и гстсрологичного штаммов вирусов и кинстичс ский метод, предложенный Me Bride W.D. (1959).
Первично-трипсинизированные культуры клеток куриных и гусиных эмбрионов п товили по методу Dulbccco R. a. Vogt M.J. (1954) в модификации Joungner (1954). Дл селекции штаммов вируса энтерита гусей использовали метод негативных колони (бляшек) в культуре ФЭГ под агаровым покрытием по методу Dulbccco R. а. Vogt М.. (1954).
Изучение генсгичсских маркеров вакцинных штаммов прозодили стандартными мс толами, описанными в руководствах Сюрика В.Н. (1966); Гсндон Ю З. (1967); Лярсхн ; (1980).
Экспериментальное (контрольное) заражение цыплят проводили производственным! вирулентными штаммами “309” или “24а” вируса ИЛТ интратрахеально в дозе 3,0 1 ИД«,; гусят ~ штаммами “11-75” и “Лив” вируса ВЭГ внутримышечно в дозе 3,0 lg ЭИД}С
Тип нуклеиновой кислоты определяли методом, в основе которого лежит ингибирс ванне репродукции ДНК - содержащих вирусов аминоптсрином (ЛРТ), веществами тип 5-флуор-дезоксиуридина (FUDR), 5-бром-дсзоксиуридина (BUDR) или 5-Йод дезоксиуридина (IUDR) (Hamparion V.V. ct al., 1963; Bartha A. ct al., 1967).
Морфологию вакцинных и эпизоотических штаммов вирусов изучали методом нега тивного контрастирования с использованием 4®/»-го раствора фосфорно-вольфрамовФ кислоты. Адсорбцию вируса проводили на сетки 200 меш, покрытые парлодионом ил! формваром. Анализ препаратов вели в электронном микроскопе TESLA-BS-540 при ни струменгальных увеличениях х50000, 75000 и 100000.
Для математического анализа полученных данных использовали метод Стъюдента Фишера (Чистяков А.И., 1966), а для определения степени антигенного родства штаммог вирусов - формулу Archetti а. Horsfall (1950).
3. Результаты исследований
3.1. Инфекционный ларинготрахеит птиц
В соответствии с письмом Главного Управления ветеринарии МСХ СССР (on 02.10.84г. №116-12) сотрудниками ВНИВИП (лабораторий общей эпизоотологии и ни русных болезней водоплавающих птиц с группой ИЛТ) проведен анализ эпизоотическо! обстановки в промышленном птицеводстве, эффективности противоэпизоотических ме роприятий и средств специфической профилактики ИЛТ. Было установлено, что с 196*. по 1989 г. ИЛТ был зарегистрирован более чем в 50 хозяйствах страны, выявлена тен денция увеличения гибели птицы отданного заболевания. В 1983 г. удельный вес отход! ггтицы от ИЛТ составил 11% в общем падеже от инфекционных заболеваний. О широкок распространении ИЛТ г оворит следующий факт: из 23 птицефабрик Ленинградской об ласти 21 тггицсфабркка проводила вынужденную вакцинацию птицы против ИЛТ. Ала логичная ситуация наблюдается во многих других регионах РФ.
8
- Київ+380960830922