Разработка иммобилизованных лекарственных форм доксорубицина и методик его анализа

2
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ............................................................6
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Антибиотики в химиотерапии злокачественных новообразований.12
1.2. Строение доксорубицина и методы его анализа................14
1.3. Основные фармакологические характеристики доксорубицина....18
1.4. Иммобилизация как один из путей снижения токсичности цитостатиков...................................................23
1.5. Перспективы использования собственных клеток организма для целенаправленной доставки лекарственных препаратов.............26
1.6. Характеристика лекарственных пленок........................29
1.7. Характеристика полимеров-носителей для пленок..............31
Заключение..................................................34
Глава 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объекты исследования.......................................35
2.2. Методы исследования........................................35
2.2.1. Исследование лекарственных пленок с доксорубицином........35
2.2.2. Включение доксорубицина в эритроцитарные носители.........37
2.2.3. Количественное определение доксорубицина микробиологическим методом диффузии в агар......................38
2.2.4. Определение содержания доксорубицина в крови методом ВЭЖХ....40 Глава 3. РАЗРАБОТКА МЕТОДИК КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДОКСОРУБИЦИНА В СУБСТАНЦИИ, ЛИОФИЛИЗИРОВАННОМ ПОРОШКЕ И КРОВИ С ПОМОЩЬЮ МЕТОДА ВЭЖХ
3.1. Определение оптимальных условий хроматографирования доксорубицина с помощью метода ВЭЖХ...........................41
3.2. Построение калибровочного графика..........................44
3.3. Разработка методик количественного определения доксорубицина
в субстанции и лиофилизированном порошке....................49
3
3.4. Разработка методики количественного определения доксорубицина в крови...........................................................54
3.4.1. Выбор оптимальных условий осаждения белка из плазмы и гемолизата эритроцитов.............................................54
3.4.2. Определение оптимальных условий выделения доксорубицина из крови с помощью гель-хроматографии.................................56
3.4.3. Разработка методики количественного определения доксорубицина
в модельных смесях............................................58
3.4.4. Разработка методики количественного определения доксорубицина
в крови лабораторных животных.................................59
Выводы................................................................61
Глава 4. ИЗУЧЕНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ВКЛЮЧЕНИЯ ДОКСОРУБИЦИНА В ЭРИТРОЦИТАРНЫЕ НОСИТЕЛИ
4.1. Включение доксорубицина в эритроцитарные носители..............62
4.2. Разработка методики количественного определения доксорубицина
в эритроцитарных носителях.....................................63
4.3. Определение влияния количества раствора доксорубицина на включение антибиотика в эритроцитарные носители....................69
4.4. Определение влияния концентрации раствора доксорубицина на включение антибиотика в эритроцитарные носители........................72
4.5. Определение влияния времени инкубации теней эритроцитов в растворе доксорубицина на включение антибиотика в эритроцитарные носители...........................................................78
4.6. Изучение устойчивости эритроцитарных носителей к десорбции и высвобождению доксорубицина........................................81
4.7. Определение стабильности эритроцитарных носителей..............83
Выводы................................................................85
13
2. Поиск и разработка новых лекарственных форм и способов введения известных противоопухолевых лекарственных средств [16,48,74].
3. Улучшение системы отбора (скрининга) противоопухолевых препаратов путем создания моделей, соответствующих опухолям человека [19].
4. Усовершенствование преклинического изучения противоопухолевых лекарственных средств и разработка оптимальных режимов их комбинированного применения [129].
5. Рациональное клиническое использование противоопухолевых препаратов в оптимальных сочетаниях с другими методами лечения - хирургией, лучевой, генной и иммунотерапией [54].
Первое сообщение о противоопухолевом действии антибиотиков было сделано в 1952 году Хакманом [29]. С тех пор, благодаря интенсивной программе отбора и испытаний, выделено большое количество антибиотиков, обладающих противоопухолевой активностью в эксперименте. Среди них ингибиторы синтеза белка и ингибиторы синтеза нуклеиновых кислот, действующие па различных уровнях: подавляющие синтез предшественников, действующие на полимеразы, нарушающие матричную функцию ДНК. Лишь немногие из них нашли практическое применение в химиотерапии рака [13,64,199]. Эффективными оказались антрациклиновые антибиотики, подавляющие синтез нуклеиновых кислот. В полихимиотерапии злокачественных новообразований наиболее широко применяются следущие антрациклины: дауномицин, доксоруби-цин и карминомицин. По выраженности мутагенного эффекта активность изученных препаратов убывает в направлении карминомицин —> доксорубицин —> дауномицин. [79,80] Доксорубицин обладает меньшей токсичностью, чем карминомицин и дауномицин [88]. Уменьшение кумулятивных свойств антрацик-л и новых антибиотиков наблюдается в ряду доксорубицин > рубомицин > карминомицин [14]. Ввиду меньшей токсичности и высокой противоопухолевой
14
активности наиболее перспективным для дальнейших исследований является доксорубицин [56].
1.2. Строение доксорубицина и методы его анализа
Доксорубицин - антрациклиновый антибиотик, содержащий в своей структуре тстрагидротстраценхиноновый хромофор (состоящий из трех плоских компланарных шестичленных колец) соединенный с сахарным остатком [76,198].
Рациональное название - (88,108)-10-[(3-амино-2,3,6-тридеокси-а-Ь-
ликсогексопиранозил)окси]-6,8,11-тригидрокси-8-(гидроксиацетил)-1-метокси-7,8,9,10-тетрагидронафтацен-5,12-дион гидрохлорид. Синонимы: адриамицин, доксолем, растоцин, адриацин, формибластии, гидроксидауномицин др. [43,138].
Антибиотик впервые выделен в Италии в 1969 году из мутагенного штамма 81тер1отусе$ реисебпз уаг.саезшБ и получен химическим путем из дауноми-цина (рубомицина) - 14-оксидауномицин (доксорубицин), обладающий более широким спектром действия [28].