2
Содержание
ВВЕДЕНИЕ..........................................................6
Глава 1. Обзор литературы........................................12
1.1. Классификация и краткая характеристика фармакологического действия нейролептиков...........................................13
1.2.Механизм действия нейролептиков..............................15
1.3. Разработка аналога иейротензина.............................16
1.4. Синтез дилепта..............................................19
1.5. Методы анализа пептидов.....................................21
1.5.1. Химическая идентификация пептидных препаратов.............21
1.5.2. Титриметрические методы анализа...........................22
1.5.3. Спектральные методы анализа...............................24
1.5.3.1. ИК-спектроскопия........................................24
1.5.3.2. ЯМР-спектроскопия.......................................26
1.5.3.3. Спектроскопия в УФ-области спектра......................26
1.5.4. Хроматографические методы анализа.........................28
1.5.4.1. Хроматография в гонких слоях сорбента...................28
1.5.4.2. Высокоэффективная жидкостная хроматография..............30
1.5.4.3. Газожидкостная хроматографии............................32
ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ 1:...............................................33
ГЛАВА 2. Объекты и методы исследования...........................34
ГЛАВА 3. Изучение физико-химических свойств и разработка методов анализа субстанции дилепта.......................................37
3.1. Изучение физико-химических свойств субстанции дилепта........37
3.1.1. Внешний вид субстанции дилепта............................37
3.1.2. Растворимость субстанции дилепта..........................37
3.1.3. Прозрачность и цветность растворов дилепта................38
3.1.4.0пределение температуры плавления субстанции дилепта........38
3.1.5. Определение удельного вращения образцов дилепта...........38
3
3.1.6. Определение потери в массе при высушивании образцов
субстанции дилепта.................................................38
3.2. Изучение спектральных характеристик дилепта...................39
3.2.1. УФ-спектроскопия............................................39
3.2.2. ИК - спектроскопия..........................................43
3.2.3. ЯМР!Н - спектроскопия.......................................45
3.3. Хроматографические методы анализа субстанции дилепта..........46
З.ЗЛ.Тонкослойная хроматография....................................46
3.3.2. Высокоэффективная жидкостная хроматография в анализе образцов субстанций дилепта........................................56
3.3.2.1. Валидация метода «Посторонние примеси»....................66
3.3.2.1.1. Специфичность...........................................66
3.3.2.1.2. Линейность..............................................67
3.3.2.1.3. Правильность............................................72
3.3.2.1.4. Расчет пределов обнаружения и предела количественного определения дилента и примесей.....................................73
3.4. Метод ГЖХ в анализе субстанции дилепта........................75
3.5. Определение капроновой кислоты................................78
3.6. Разработка методики количественного определения дилепта 81
3.6.1. Количественное определение дилепта методом титрования в неводных средах....................................................81
3.6.2. Использование метода гидролиза в щелочной среде.............84
3.6.3. Использование метода Къельдаля в качестве метода
количественного определения........................................85
5.6.3.1. Валидация методики количественного определении дилепта методом Къельдаля..................................................89
3.7. Применение химических реакций для определения подлинности дилепта............................................................89
3.8. Устойчивость субстанции в условиях повышенной влажности 91
3.9. Изучение влияния на субстанцию дилента солнечного света 91
17
нейролептика [88] и потенциального лекарственного препарата для лечения шизофрений. Однако сложная структура этого тридекапептида, обуславливающая низкую биодоступность и неспособность проникать через гемагоэнцефалический барьер, исключает возможность его клинического применения [51].
Оригинальный подход к поиску высокоэффективных нейролептиков, разрабатываемый в ГУ НИИ Фармакологии РАМН, основан на создании модифицированных дипептидов, имитирующих структуру поворотного биологически активного фрагмента НТ 8-13 и атипичного антипсихотика сульпирида. Из серии синтезированных пептидомиметиков нейротензина был отобран метиловый эфир Ы-капроил-Ь-пролил-Ь-тирозина (дилепт), обладающий наиболее выраженной ДА-негативной активностью в диапазоне доз 0,4-4 мг/кг, не проявляющий каталептогенного действия, седативного и миорелаксирующего побочных эффектов. Это позволило рассматривать дилепт в качестве потенциального «атипичного» нейролептика, не вызывающего экстрапирамидных расстройств [51].
Небольшие молекулы ди/трипептидов и их производные могут быть самыми перспективными препаратами среди НТ аналогов. Эти пептиды более доступны и менее полифункциональны по сравнению с полипептидами. Кроме того, небольшие пептиды в некоторых случаях энзиматичсски более стабильны и, следовательно, могут приниматься энтерально [96, 97].
Структура сульпирида ([5-аминосульфонил)-И-[(1-этил-2-
пирролидинил]-2-метоксибензамид]), атипичного нейролептика
производного бензамида, была выбрана в качестве стартовой точки в синтезе пептидов, поскольку действие сульпирида доказано многолетним опытом [88] и не сопровождается экстрапирамидными нарушениями, а также сульпирид имеет некоторое сходство с НТ.
Структура сульпирида содержит пирролидиновое кольцо и замещенную фенильную группу, которые разделены амидной связью. Из
этого было сделано предположение, что сульпирид является структурным аналогом Рго-Туг-ди пептидных фрагментов некоторых полипептидов. Структурные формулы сульпирида и амида Ь-пролил-Ь-тирозина представлены на рисунке 1.
Сульпирид
L-Pro-L-Tyr-NH2
рис. 1. Структурные формулы сульпирида и L-Pro-L-Tyr-NH2
Для увеличения активности L-pro-L-Tyr-NH2, в структуру пептида была включена N-ацетильная группа, которая могла имитировать гидрофобную часть Лейцина в ß-структуре НТ. Было показано, что введение N-ацетильного фрагмента в дипептид приводит к увеличению активности или, по крайней мере, не изменяет активность. Увеличение количества СН2 групп кислоты приводит к увеличению активности (Ы-капроил-Про-Тир-МН2). Дальнейшее же удлинение цепи не изменяет фармакологические свойства молекулы [97J.
Таким образом, было подтверждено предположение о том, что достаточная длина ацильного остатка может' имитировать Leu13 остаток НТ, который отвечает за проявление активности. Также было оценено влияние аминокислотного остатка на проявление свойств молекулы. Было показано, что замещение L-Tyr на D-Tyr приводит к потере активности, в то время как замещение L-Pro на D-Pro не влияет на фармакологическую активность молекулы [97].
- Київ+380960830922