СОДЕРЖАНИЕ Стр.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ---------------------------------------------14
1.1 Герпесвирусные инфекции лошадей-----------------------------14
1.2 Патогенез и иммуногенез ВГЛ-1-------------------------------17
1.3 Вакцины : живые, инактивированные, генно - инженерные 25
1.4 Биологическая активность вакцин для лабораторных животных и методы контроля иммуногенности вакцин---------------------------35
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ-------------------------------------------45
2.2.1 Культивирование вируса в культурах клеток---------------46
2.2.2 Культивирование вируса в организме лабораторных
животных------------------------------------------------------47
2.2.3 Иммунизация лабораторных животных-----------------------48
2.2.4 Полимеразная цепная реакция-----------------------------49
2.2.5 Гистохимические исследования----------------------------50
2.2.6 Серологические исследования-----------------------------51
2.2.7 Статистическая обработка полученных результатов---------54
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ--------------------------------------55
3.1 Изучение гуморального иммунного ответа у мышей--------------55
3.1.1 Изучение гуморального иммунного ответа в динамике у мышей зависимости от природы иммуногена--------------------------55
3.1.2 Эффективность комбинированного введения вакцинных препаратов при использовании различных схем иммунизации----59
3.2 Оценка напряжённости поствакцинального иммунного
ответа на модели ВГЛ-1 энцефалита у мышей------------------------64
3.2.1 Изучение нейропатогенных свойств ВГЛ-1------------------64
3.2.2 Селекция нейротропного штамма ВГЛ-1 патогенного
для взрослых мышей--------------------------------------------70
3.2.3 Оценка возможности использования адаптированного штамма «ПП1/І» для контроля иммуногенности вакцин против РПЛметодом контрольного заражения------------------------------------75
3.2.4 Определение оптимальной заражающей дозы адаптированного штамма для мышей--------------------------------------79
3.2.5 Лабораторное испытание иммуногенности вакцинного штамма
3.2.6 Определение оптимальной иммунизирующей дозы для различных вакцин--------------------------------------80
3.2.7 Экспериментальная оценка иммуногенности вакцин при однократной и двукратной иммунизации мышей против РПЛ-84
3.3 Оценка напряжённости поствакциналыюго иммунного ответа на модели ВГЛ-1 аборта у мышей------------------------94
3.3.1 Изучение влияния ВГЛ-1 па беременность--------------94
3.3.2 Оценка напряжённости гашу иного ответа на
модели ВГЛ-1 аборта у мышей-------------------------------97
4.0БСУЖДЕНИЕ---------------------------------------------------99
ВЫВОДЫ--------------------------------------------------------115
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ--------------------------------------117
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ---------------------------------------------118
ПРИЛОЖЕНИЯ----------------------------------------------------141
3
иммуноферментным анализом (ИФА)», утверждённая директором ВИЭВ в 2007
г.
Материалы диссертации использованы в дополнении, подготовленном Референтной лабораторией МЭБ по ринопневмонии лошадей (эксперт К.П. Юров) для нового издания «Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines», раздел Equine diseases in list В, глава Equine rhinopneumonitis, Office International des Epizooties.
Апробация работы
Материалы работы были представлены на 2-м Московском международном Конгрессе «БИОТЕХНОЛОГИЯ: СОСТОЯНИЕ И ПЕРСПЕКТИВЫ
РАЗВИТИЯ». Секция 2 - Биотехнология и сельское хозяйство (Москва, 2003), на Международной научной конференции «Современные достижения и проблемы клеточной биотехнологии и иммунологии в ветеринарной медицине» (Москва, 2003), на Международном симпозиуме «Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний» (Казань, 2005). Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные в диссертации, обсуждены и одобрены на межлабораторном научно-производственном совещании научных сотрудников ГНУ ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко (Москва, 2007 г.).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 7 научных работ.
13
Объем и структура диссертации
Материалы диссертации изложены на 149 страницах машинописного текста и состоят из следующих разделов: введение, обзор литературы, результаты исследования, обсуждение выводы, практические предложения, список литературы и приложения. Список литературы содержит 132 источника, из них
- 122 иностранные. Диссертация иллюстрирована 5 таблицами, 18 рисунками.
1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. 1 Герпесвирусные инфекции лошадей.
В настоящее время известны герпесвирусы лошадей 9 типов, представленные альфа - и гаммагерпевирусами (см. табл. 1). Из герпесвирусных болезней лошадей наибольшее экономическое значение имеют инфекции, возбудителями которых являются ВГЛ-1, вызывающий массовые аборты у кобыл, патологию органов дыхания у жеребят, спорадические случаи миелоэнцефалопатии у лошадей, независимо от возраста и физиологических особенностей; ВГЛ-4 - возбудитель ринопневмонии и спорадических абортов; ВГЛ-3 - возбудитель коитальной экзантемы лошадей, острого контагиозного заболевания, при котором поражается эпителий влагалища у кобыл и полового члена у жеребцов; ВГЛ-9
- возбудитель миелоэнцефалопатии лошадей и других гетерогенных хозяев: газелей, зебр, антилоп - часто с летальным исходом. Вирусы 2 и 5 типов (гаммагерпесвирусы) вызывают латентную инфекцию, а также участвуют в развитии респираторных поражений у жеребят. (К. П. Юров, 2000)
14
- Київ+380960830922