Оглавление
2
Оглавление
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ............................................6
1.ВВЕДЕНИЕ 8
1.1 Актуальность темы........................................8
1.2 Цель и задачи исследований..............................10
1.3 Научная новизна.........................................11
1.4 Практическая значимость раеоты..........................12
1.5 Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту......................................................12
1.6 Апробация и публикация результатов исследований.........13
1.7 Личный вклад............................................13
2.0Б30Р ЛИТЕРАТУРЫ..........................................14
2.1 Блютанг: характеристика болезни, распространение,
ЭКОНОМИЧЕСКИЙ УЩЕРБ.........................................14
2.2 Биологические свойства вируса блютанга..................18
2.3 Культивирование вирусов сельскохозяйственных животных в перевиваемых линиях клеток..................................20
2.4 ИНАКТИВАНТЫ И АДЪЮВАНТЫ, ПРИМЕНЯЕМЫЕ ПРИ ИЗГОТОВЛЕНИИ
ВАКЦИН......................................................24
2.4.1 Инактиванты...........................................24
2.4.2 Адъюванты.............................................28
2.5 Средства специфической профилактики ьл юта ига..........33
2.5.1 Живые вакцины.........................................33
2.5.2 Инактивированные вакцины..............................35
2.5.3 Вакцины нового поколения..............................36
2.6 Заключение по обзору литературы.........................39
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.................................41
Оглавление 3
3.1 Материалы и методы................................................41
3.1.1 Вирус...........................................................41
3.1.2 Культуры клеток.................................................42
3.1.3 Питательные среды, растворы и сыворотки.........................42
3.1.4 Реактивы........................................................42
3.1.5 Оборудование....................................................43
3.1.6 Животные........................................................43
3.1.7 Выращивание перевиваемых линий клеток...........................43
3.1.8 Культивирование вируса блютанга в перевиваемых культурах клеток 44
3.1.9 Определение инфекционной активности вируса......................45
3.1.10 Инактивация вируса блютанга....................................45
3.1.11 Определение полноты инактивации вируса.........................45
3.1.12 Приготовление масляного адъюванта..............................46
3.1.13 Приготовление образцов инактивированной вакцины................46
3.1.14 Постановка сэндвич метода ТФ ИФА на основе МА для обнаружения антигена..............................................................47
3.1.15 Оценка иммуногенности образцов вакцины.........................48
3.1.15.1 Постановка варианта двухфазного ингибирования ТФ ИФА на
основе МА для обнаружения специфических антител.......................48
3.1.16 Выделение РНК и синтез к ДНК...................................49
3.1.17 Постановка ПЦР.................................................50
3.1.18 Статистическая обработка результатов исследований..............50
3.2 Результаты собственных исследований...............................51
3.2.1 Обоснование выбора серотипов вируса блютанга при разработке
средств специфической иммунопрофилактики этой болезни.................51
3.2.2 Выбор технологически перспективной клеточной культуры для
выращивания вируса блютанга...........................................51
3.2.3 Разработка производственной технологии культивирования вируса 53
Введение
13
2. Сравнительная оценка эффективности инактивантов (А-24, ДЭИ, СиБО^) и адъювантов (масляный и ГОА) по иммуногенности готовых вакцинных препаратов.
3. Технология изготовления и методы контроля моно- и бивалентной инактивированной вакцины против блютанга 4 и 9 серотипов.
4. Результаты испытаний инактивированных моно- и бивалентных вакцин против блютанга.
1.6 Апробация и публикация результатов исследований
Основные материалы по теме диссертации доложены на заседаниях ученого совета ВНИИВВиМ (2000, 2001, 2002 гг.), международной научно-практической конференции ВНИИВВиМ (г. Покров, 2002).
Результаты исследований в период с 2000 по 2002 гг. опубликованы в 9 научных статьях, в том числе одна - в журнале «Доклады РАСХН» и восемь -в материалах научно-практических конференций. Материалы работы включены в отчеты о НИР ВНИИВВиМ и в нормативно-технических документы.
1.7 Личный вклад
Работа выполнена в лаборатории «Биология и культивирование вирусов» ВНИИВВиМ. Раздел исследований «Использование ПЦР для оценки полноты инактивации вируса блютанга» выполнен совместно с д.б.н. Цыба-новым С.Ж. Постановку сэндвич метода ТФ ИФА на основе МА для обнаружения антигена вируса блютанга выполняли совместно с д.б.н. Стрижаковым A.A. и к.б.н. Новиковой М.Б. Остальные разделы работы были выполнены лично автором.
Обзор литературы
14
2. Обзор литературы
2.1 Блютанг: характеристика болезни, распространение,
экономический ущерб
Блютанг (катаральная лихорадка овец, «синий язык») - вирусное, трансмиссивное заболевание, передающееся кровососущими насекомыми из рода Culicoides. В естественных условиях к заболеванию наиболее восприимчивы молодые овцы, меньше козы, крупный рогатый скот. Европейские породы овец более чувствительны, чем африканские и азиатские породы. Из дикой фауны болеют горные газели, большерогие бараны, белохвостые олени, снежные бараны, антилопы, лоси [5, 2, 61, 65, 8, 71, 77, 134, 178, 187]. Во время эпизоотии блютанга вирус удавалось также выделить из организма диких грызунов. Считают, что дикие животные и грызуны могут быть резервуарами вируса в природе [133].
Впервые болезнь была установлена у овец в Южной Африке в 1876г. Клинические аспекты блютанга были описаны Hutcheon - главным ветеринарным врачом Колонии в Южной Африке, в его годовом отчете за 1880 год. В 1933г болезнь диагностировали и у крупного рогатого скота. В 1905 году
A. Theiler открыл ее возбудителя, установив его фильтрующуюся природу [185]. Однако, Gutsche Т. считает, что самое первое упоминание о блютанге у овец и крупного рогатого скота было сделано французским зоологом Francois de Vaillant, путешествовавшего в 1781-1784 годах по мысу Доброй Надежды (Южная Африка) [127]. В 1902 году "малярийная катаральная лихорадка" была впервые упомянута в научной литературе в статье Hutcheon D. [139]. Автор утверждал, что инфекционным агентом при этом заболевании является передающийся насекомыми плазмодий.
Вначале болезнь поражала овец местных пород и чаще протекала бессимптомно. С ввозом в Африку высокочувствительных овец европейских пород болезнь распространилась по всему Африканскому континенту и приняла злокачественный характер, а в последующие годы блютанг вышел за
- Київ+380960830922