Генетичний аналіз репродуктивних ознак медичной п'явки

<p style="font-family: 'Times New Roman', 'Times', serif; font-size: 18px; background-color: #ffffff;"><span style="background-color: #ffffff;">РАЗДЕЛ 2<br />МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ<br />2.1. Исследуемый материал и измерение основных показателей<br />Объект исследования - популяция Hirudo medicinalis f. officinalis, особи<br />которой скрещивались панмиктично в условиях аквакультуры. Маточное стадо H.<br />medicinalis было закуплено на биофабрике по разведению медицинских пиявок в г.<br />Санкт-Петербурге. В результате последо­вательных репродукций получена<br />промышленная популяция, в которой изучались плодовитость особей, сроки<br />репродукции, их модификация средовыми условиями и общая адаптивность. Также<br />проводилось изучение наследования основных репродуктивных признаков H.<br />medicinalis. <br />Взятая для исследований субпопуляция являлась репрезентативной выборкой из<br />особей, приступающих к первой репродукции. Были проана­лизированы данные о<br />структуре 386 семей, включающие информацию о 231 кладке, 734 коконах и 5131<br />нитчатке. В ходе анализа использовались родственные связи между сибсами,<br />полизиготными близнецами, родителя­ми и потомками. Измерялись следующие<br />показатели: размер кладки, количество нитчаток в коконе, общее количество<br />потомков, масса нит­чаток, масса после кормления, помесячная смертность молоди,<br />численность потомства по достижении 6-месячного возраста, созреваемость<br />коконов. Производными от измеренных показателей были прирост массы,<br />жизне­способность нитчаток из разных кладок, жизнеспособность нитчаток из<br />разных коконов, жизнеспособность нитчаток с разной массой. Все данные были<br />структурированы в соответствии с родственными отношениями. <br />Влияние негенетических факторов на репродуктивные признаки частично изучалось<br />по данным, приведенным в работе Д.В.Запкувене [49]. <br />2.2. Содержание и разведение H.medicinalis f. officinalis<br />Содержание и разведение медицинских пиявок осуществлялось по методикам,<br />описанным в работах [49, 50, 106, 107]. Для содержания животных использовалось<br />затененное помещение, температура которого постоянно поддержи­валась на уровне<br />18-20 °С. Пиявки находились по 1-5 штук в 3-литровых емкостях, заполненных<br />водой. <br />В начале периода размножения пиявки рассаживались попарно в 3-литро­вые<br />емкости с водой. Температура в помещении поддерживалась на уровне 25 °С. В<br />течение 1 месяца между пиявками каждой пары происходили многократные<br />совокупления, как односторонние, так и двусторонние. В дальнейшем пиявки<br />рассаживались поодиночке в 3-литровые емкости для откладки коконов. Субстратом<br />для откладки коконов служил влажный торфяной грунт. Откладка коконов<br />продолжалась в течение 2-х месяцев. Через месяц после откладки из коконов<br />выходили нитчатки. Нитчатки из каждого кокона помещались в отдельную емкость с<br />водой. <br />Кормление пиявок осуществлялось свежей кровью крупного рогатого скота. Кровь<br />разливалась по емкостям (50-200 мл), отверстия которых затяги­вались тканью<br />тонкого кишечника крупного рогатого скота, и опускалась в банки с пиявками.<br />Кормление взрослых пиявок осуществлялось 1 раз в 5-6 месяцев, а также перед<br />размножением и откладкой коконов. Первое кормление нитчаток осуществлялось<br />через 10-15 дней после выхода из коконов, после­дующие два - с интервалом в 30<br />дней, следующие - через 2 месяца. <br /> <br />2.3. Генетический анализ количественных признаков<br />Для описания вариации и распределения селекционно-ценных признаков<br />использовались стандартные методы математической статис­тики, для исследования<br />взаимосвязи между парами признаков применялись методы дисперси­онного,<br />корреляционного, регрессионного и кластерного анализов [19, 43, 67, 95].<br />Обработка данных и построение графиков осуществлялись с помощью компьютерной<br />программы STATISTICA 5.0 <br />for WINDOWS [21]. <br />Оценка наследуемости репродуктивных признаков проводилась в макси­мально<br />благоприятных условиях содержания, стандартизованных на существу­ющих<br />биофабриках по разведению H.medicinalis. В группах родственников с<br />фиксированной степенью родства измерялась фенотипическая дисперсия<br />репродуктивных признаков. В генетической структуре наследования признака<br />Vp=Vg+Ve общая фенотипическая дисперсия Vp складывается из гено­типической Vg и<br />паратипической Ve компонент. Генотипическая дисперсия включает компоненты,<br />обусловленные аддитивным действием генов Va, эффектами доминирования Vd и<br />эпистаза. Паратипическая, или средовая, дисперсия включает внутрисемейную Ves и<br />межсемейную Vew компоненты [24, 29, 36, 39, 75, 125]. В настоящей работе<br />эпистатическая компонента не учитывалась, и принималось, что <br />Vp = Va+Vd+Ves+Vew.<br />Наследуемость в широком смысле Н2 рассчитывалась как отношение всей<br />генотипической дисперсии к общей фенотипической:Н2=. Наследуемость в узком<br />смысле h2, или селекционная ценность, рас­считывалась как отношение аддитивной<br />генотипической дисперсии к общей фенотипической:h2=. <br />Основой способов определения аддитивной компоненты дисперсии является положение<br />о том, что фенотипическое сходство между родителями и потомством или между<br />одновозрастными потомками определяется генетически. Для получения значений<br />компонент фенотипической дисперсии использо­вались методы дисперсионного и<br />регрессионного анализов. При использовании однофакторного дисперсионного<br />анализа меж­групповая sа2 и внутригрупповая sе2 дисперсии, коэффициент<br />внутри­групповой корреляции t рассчитывались по формулам:sа2=(Sa2-Se2)/n,где<br />Sa2 - факториальная дисперсия, Se2 - остаточная дисперсия, n - средний размер<br />семьи [67].sе2=Se2,t=sа2/(sа2+sе2).При использовании двухфакторного<br />иерархического дисперсионного анализа межгрупповые sа2, sв2 и внутригрупповая<br />sе2 дисперсии, коэффициент внутригрупповой корреляции t рассчитывались по<br />формулам:sа</span></p>