РОЗДІЛ 2
МАТЕРІАЛИ ТА МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
2.1. Об'єкт і методи досліджень
В основу обраного нами напрямку досліджень функціонального стану нейтрофілів покладений той важливий факт, що фагоцитоз виступає провідною функцією елементів нейтрофільного паростка гранулоцитарної ланки. Дослідження фагоцитарної активності нейтрофілів (ФАН) дозволяють оцінювати не тільки ступінь зрілості, але й функціональну активність клітин нейтрофілопоезу [35, 80, 114, 135, 148].
Проведено клініко-гематологічний скринінг 1700 осіб, які зазнали впливу ІВ у різних дозах внаслідок аварії на ЧАЕС. Обстеженню підлягали учасники ЛНА на ЧАЕС, які працювали на енергоблоках і проммайданчиках станції з 1986 по 1987рр. та знаходились у найбільш забруднених ділянках. Усі обстежені нині мешкають на території Сумської області.
Із загальної кількості виділена група із 185 осіб у віці від 35 до 65 років, із них 138 - особи чоловічої статі, 47 - особи жіночої статі. Згідно з поданою в документації інформацією, дозове навантаження обстежених коливалося від 0,08 до 0,85 Гр. Дана група була розділена на 3 підгрупи: особи із стійкими відхиленнями показників ПК; особи з гематологічними мієлопроліферативними захворюваннями (такими, як хронічний мієлолейкоз - ХМЛ, хронічний остеомієлофіброз - ХОМФ); а також особи без гематологічних порушень. Гематологічними критеріями відбору для дослідження були тривалі (не менше року) стійкі відхилення лейкоцитів ПК: лейкоцитози, лейкопенії, моноцитози, лімфоцитози, які у низці випадків супроводжувалися порушеннями інших показників гемограми (анемією). Випадки тромбоцитопіній або тромбоцитозів у пацієнтів зі стійкими відхиленнями у ПК виявлені не були. Підставою для об'єднання групи осіб, які одержали дозу до 1 Гр, послужили наукові дані із першоджерел, що засвідчили існування єдиного механізму радіаційних порушень на клітинному рівні [106].
Окрім вищепредставленої групи осіб, що зазнали дії ІВ, нами були обстежені пацієнти з аналогічними гематологічними стійкими відхиленнями показників ПК, а також хворі з мієлопроліферативними захворюваннями (ХМЛ, ХОМФ), які не брали участі в ЛНА (79 осіб).
Контрольну групу склали 87 практично здорових людей (66 осіб чоловічої статі і 21 особи жіночої статі) віком від 35 до 65 років, які не мали відхилень у аналізах крові і були донорами відділення переливання крові. При об'єктивному обстеженні осіб контрольної групи порушень з боку внутрішніх органів і систем не виявилося. Середні значення показників ПК у осіб контрольної групи подані в кожному із відповідних розділів дослідження.
Розподіл осіб основних і контрольної груп представлено в табл. 2.1.
Об'єктом нашого дослідження були учасники ліквідації наслідків аварії на ЧАЕС, особи нозолічного контролю, які не зазнали впливу Чорнобильської катастрофи.
У ході дослідження використані такі методи наукового аналізу:
1. Аналіз ПК з визначенням умісту гемоглобіну, підрахунок кількості еритроцитів, лейкоцитів, тромбоцитів, лейкограми, а також абсолютного умісту гранулоцитів, лімфоцитів і моноцитів.
2. Вивчення якісних характеристик елементів лейкоцитарного ряду в мазках ПК.
3. Цитохімічне дослідження лейкоцитів:
- визначення активності мієлопероксидази нейтрофільних гранулоцитів (за методом Lоele, 1936 [216];
- визначення активності лужної фосфатази за методом Kaplow (1955) у модифікації Дж.Хейхоу [201];
- визначення активності хлорацетатестерази за Molonеy, 1960 р. [266];
- визначення вмісту катіонних білків за М.Г.Шубичем, 1974 р. [213].
Морфологічні і цитохімічні особливості нейтрофільних гранулоцитів оцінювали в мазках ПК. При розгляді морфологічних особливостей враховували загальний вигляд і розміри клітин, ядерно-цитоплазматичне співвідношення, форму ядра, наявність гранул і патологічних включень у цитоплазмі, інтенсивність забарвлення цитоплазми, виявляли ознаки патологічної дегенерації.
Обчислення цитохімічних реакцій здійснювалося напівкількісним методом (за Kaplow) [256]. Результати обчислення були виражені у вигляді середнього цитохімічного коефіцієнта (СЦК, ум.од.).
Таблиця 2.1.
Розподіл осіб за групами
ГрупиСтатьВсього (осіб)Нумерація групиЧоловічаЖіноча1Контрольна група (донори)66218712Учасники ЛНА на ЧАЕС:а) з нормальними показниками ПК;91321236б) зі стійкими гематологічними відхиленнями:- лейкопенії;2310337- лейкоцитози;84128в) з мієлопроліферативними захворюваннями:- ХМЛ;6-69- ХОМФ11-11103Особи, які не були опромінені:а) із стійкими гематологічними відхиленнями:- лейкопенії;16132911- лейкоцитози;1221412б) з мієлопроліферативними захворюваннями:- ХМЛ;213243- ХОМФ75124ВСЬОГО:26190351
4. Фагоцитарну функцію нейтрофілів вивчали методом визначення їх поглинаючої здатності (С.Г. Потапова, В.С. Хрустиков, 1977 р.[81]) у власній модифікації. У якості об'єкт-теста використовували частинки латексу (d = 1,42-1,5 мкм) беручи за основу таке співвідношення: 1 нейтрофіл - 55 частинок латексу. Спостерігали і аналізували температурну залежність, яка знаходилася у межах від 200 до 500С, за 0.5, 1, 2, 3, 4, 5-годинний час інкубації.
Розрахунок фагоцитарного показника (ФП), фагоцитарного індексу (ФІ) і загальної фагоцитарної активності (ЗФА) здійснювали шляхом аналізу стану 100 клітин у різні періоди інкубації.
5. Для характеристики факторів гуморальної ланки імунітету та неспецифічного захисту у досліджуваних осіб визначали:
- сироваточні імуноглобуліни основних класів IgА, IgМ, IgG з використанням імуноферментних тест-систем на комплектах лабораторного обладнання Multiskan Labsystem (Фінляндія) або bio Меrieux (Франція);
- титр комплементу за К.Ф.Чернушенко та ін. [196].
- рівень природних антитіл - гетерофільних аглютинінів за методом К.Ф.Чернушенко та ін. [196].
6. За допомогою методу математичних співвідношень з'ясовували діагностичні критерії патологічних станів.
- Київ+380960830922