РАЗДЕЛ 2
УСЛОВИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА И МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1 Оборудование и реактивы
2.1.1. Оборудование. Потенциометрические измерения были выполнены с помощью компенсационной схемы (потенциометр P 307; нуль-инструмент pH метр-милливольтметр рН-120, электрод сравнения ЭВЛ - 1M3). Среднеквадратичное отклонение измерений э.д.с. не превышало ± 0.3 мВ. Значения pH рабочих растворов определяли в ячейке с переносом со стеклянным электродом ЭСЛ-63-07:
стеклянный электрод (Н+) | буфер Н+ ¦¦ 2 M KNO3 ¦¦ KClнас | AgCl, Ag.
Жидкостный контакт в ячейке осуществлялся с помощью соединения типа капилляр-пришлифованная к нижней части муфта, заполненного KNO3 с концентрацией 2 моль/л. Такая конструкция электролитического ключа обеспечивает обновление и стабильность жидкостного соединения, при этом строение жидкостной границы приближается к жидкостному соединению со свободной диффузией [211]. Градуировка ячейки осуществлялась по стандартным буферным растворам с рН 9.18, 6.86, 4.01, 3.56 и 1.68.
Для потенциометрического определения ККМ использовались мембранные электроды с откликом на мономерные анионы DS-, полученные модификацией промышленных анион-селективных мембраных электродов EM-NO3-01 [А 2]. Их мембраны вымачивали в 0.001 моль/л растворе NaDS в течение нескольких суток; внутренний раствор таких электродов содержал 0.001 моль/л NaDS и 0.005 моль/л KCl. Модифицированные таким способом электроды хранились в растворе 0.001 моль/л NaDS, а непосредственно перед измерениями в более разбавленных растворах выдерживались в дистиллированной воде в течение часа.
Для термостатирования рабочих растворов использовался термостат U-10 с точностью термостатирования ?0.1?С; рабочая жидкость - дистиллированная вода.
В спектрофотометрических исследованиях использовались приборы KФK-3 и СФ-46. Поглощение рабочих растворов измеряли против раствора сравнения, содержащего все компоненты, кроме индикатора. Проверка показаний длин волн на цифровом табло KФK-3 осуществлялась с помощью контрольного светофильтра "К-3": среднее значение длины волны в точке максимального пропускания соответствовало табличному ? для "К-3" с погрешностью не более 3 нм. Шкала коэффициента пропускания проверялась по набору нейтральных светофильтров "К-1" и "К-2" с погрешностью не более 0.5%. Контрольные измерения поглощения (А) проводили для одних и тех же растворов на различных приборах, в том числе на Hitachi U 3210 и на СФ-26 с удовлетворительным совпадением. Использовали набор стеклянных кювет от 1 до 5 см в зависимости от интенсивности окраски раствора с таким расчетом, чтобы измеряемое значение поглощения было не ниже 0.1 и не выше 0.8. Погрешность измерения А: ?0.005 ед. Измерения поглощения в растворах NaDS проводили при 25.0 ? 0.5 ?С, в растворах M(DS)2 - при 30 ? 1 ?С.
Полуколичественные электрофоретические эксперименты по определению знака электрокинетического потенциала (?-потенциала) мицелл при введении модификатора проводились с U-образными трубками (приложенное напряжение 100 мВ, расстояние между платиновыми электродами - 0.2 м) с использованием нейтрального красителя Судан III.
В методе мицеллярной жидкостной хроматографии использовали жидкостный хроматограф фирмы "Hewlett Packard" серии 1050, снабженный насосной системой 79851 А/52, автосамплером 79855А, спектрофотометрическим детектором с изменяемой длиной волны 79853С и интегратором НР 3395. Хроматографическая колонка Hypersil ODS (Merck KgaA, D-64293 Darmstadt, Germany) с размером внутреннего диаметра 200 мм ? 4.6 мм была заполнена сорбентом С 18 (размер частиц 5 ± 1 мкм). Для разделения пяти производных рубомицина были выбраны следующие условия хроматографирования: длина волны детектирования - 254 нм; скорость подвижной фазы - 1.0 мл/мин; температура колонки 30.0 ± 0.1 оС; объем вводимой пробы - 10 мкл [A 7].
Все хроматографические измерения выполнены в лаборатории фармакопейного анализа Научно-экспертного фармакопейного центра (г. Харьков) ст.н.с. Куликовым Артемом Юрьевичем.
Для визкозиметрического определения формы и размеров мицеллярных агрегатов использовался капиллярный вискозиметр Оствальда с диаметром капилляра 5.6?10-4 м [A 3]. Относительное среднеквадратичное отклонение определения вязкости составила менее 1%.
2.1.2. Реактивы. Поверхностно-активные вещества. В работе использовалось анионное ПАВ додецилсульфат натрия ("Sigma" или "Merk") с массовой долей основного компонента не менее 99%; в отдельных случаях содержание NaDS в препарате составляло не менее 98%. Из него были синтезированы додецилсульфаты с двухзарядными противоионами - Mg(DS)2, Cu(DS)2, Co(DS)2 и Ni(DS)2 - путем добавления к 0.1 моль/л NaDS двухкратного избытка растворов хлоридов соответствующих металлов [А 2-А 4, А 8-А 10]. Суспензия выдерживалась в течение суток при температуре 19-20 ?С. Осадок M(DS)2 отделяли фильтрованием и очищали повторной перекристаллизацией из воды; после каждой кристаллизации осадок тщательно промывали холодной водой (17 ОC). Очищенный препарат высушивался на воздухе в течение суток.
Содержание меди (II) в полученном препарате определяли методом йодометрии, а остальных катионов металлов - комплексонометрическим титрованием [212]. Содержание додецилсульфата определяли потенциометрическим титрованием со свинец (II)-селективным электродом по методике, опубликованной ранее [А 1]. Согласно результатам анализа, состав полученных препаратов отвечает формулам Cu(DS)2?3H2O, Mg(DS)2?6H2O, Co(DS)2?6H2O и Ni(DS)2?6H2O, что согласуется с литературными данными [104, 125].
Из-за относительно высоких значений температуры все исследования мицеллярных растворов M(DS)2 были выполнены при 30 ОC. Хотя эта температура является более низкой, чем значение точки Крафта (31.5 ОC) для системы Mg(DS)2 - H2O [79], образования осадка не наблюдается. Это согласуется с литературными данными о том, что осаждение начинается только после 2-3 часов выдерживания мицеллярного раствора