Глава 2
Объект и методы исследования
2.1. Характеристика групп обследованных лиц
Обследованы четыре группы спортсменов ациклического вида спорта (волейболисты и
баскетболисты) высокой и низкой квалификации в возрасте 21-22 лет, мужского
пола. В группы спортсменов высокой квалификации вошли мастера спорта и
кандидаты в мастера спорта, остальные группы составили спортсмены низкой
квалификации II и III разрядов , занимающиеся спортом в течение 3-х лет 3 раза
в неделю. В каждой обследованной группе было по 19 человек. Всего обследовано
76 спортсменов.
Контрольную группу составили 20 человек, в возрасте 21-22 лет, мужского пола,
не занимающиеся спортом.
Кровь брали из локтевой вены до и после физической нагрузки аэробно-анаэробного
характера ациклического типа (2 часа учебно-тренировочных занятий).
Материалом для исследования служили плазма крови, эритроцитарные мембраны и
гемолизат эритроцитов.
2.2. Получение плазмы и гемолизата эритроцитов
Для получения плазмы крови и гемолизата эритроцитов использовали метод Драбкина
[195]. Эритроциты отделяли от плазмы центрофугированием при 3000 об/мин на
протяжении 20-ти минут. Плазму использовали в дальнейших исследованиях.
Эритроциты промывали четыре раза охлажденным физиологическим раствором.
Промытые эритроциты гемолизировали равным объемом дистиллированной воды в
отсутствии толуола во избежание образования метгемоглобина; встряхивали
несколько минут и помещали в холодильник при 4°С для полного прохождения
гемолиза, который контролировали при помощи микроскопа.
После гемолиза содержание пробирок центрифугировали при 8-10тыс. об/мин на
протяжении 15 минут. Гемолизат отбирали из-под стромы при помощи пастеровской
пипетки и фильтровали.
2.3. Методы исследований
Определение содержания общих липидов в плазме крови
и в мембранах эритроцитов.
Пробы колориметрировали на КФК-3 (длина волны 590 нм) при толщине оптического
слоя 1 см против контроля.
Для расчета содержания общих липидов использовали формулу (2.1) :
Еоп
С = , где
Ест
С – содержание общих липидов в мг/мл;
Еоп – экстинкция опытной пробы;
Ест – средняя экстенкция стандартных проб [18].
. Определение содержания первичных продуктов
перекисного окисления липидов
Гептановый экстракт, полученный из плазмы крови и мембран эритроцитов,
спектрофотометрировали (СФ-16) при длине волны 232 нм (диеновые конъюгаты) и
273 нм (кетоны) против гептана.
Для расчета содержания первичных продуктов ПОЛ использовали
формулу (2.2)
Е232 + Е273
А = , где
С
А – содержание продуктов ПОЛ в усл. ед/мг липидов,
Е232 и Е273 - экстинкции при соответствующих длинах волн;
С – концентрация общих липидов [40].
Определение содержания вторичных продуктов ПОЛ
(малонового диальдегида)
Измерения оптической плотности производили при 535 и 560 нм против
дистиллированной воды.
Для расчета содержания МДА использовали формулу:
( 2.3 )
Е535 - Е560
МДА = , где
С
Е535 и Е560 – экстинкции опытных проб при соответствующих длинах волн;
С – содержание общих липидов.
Количественное содержание МДА выражали в усл. ед/мг липидов.
Выделение эритроцитарных мембран.
Мембраны эритроцитов выделяли по методу Т.А.Сербиновой [123]
Количественный анализ жирнокислотного состава в
плазме крови и в эритроцитарных мембранах методом
газо-жидкостной хроматографии.
Газо-хроматографический анализ метиловых эфиров жирных кислот проводили на
хроматографе «Intersmat» (Франция) с пламенно-ионизационным детектором.
Метиловые эфиры жирных кислот получали с использованием тетрафлуоридбора 14% в
метаноле [244].
Исследования проводили на хромато-масс-спектрометре «Финиган 3200 Г» с
автоматической системой обработки данных.
Определение количественного содержания гемоглобина
и метгемоглобина.
Определение содержания гемоглобина в гемолизатах
Концентрацию гемоглобина в гемолизатах определяли унифицированным
гемоглобинцианидным методом, применяемым в практике клинической биохимии.
Расчет содержания гемоглобина в г/л производили по колибровочному графику.
Определение количественного содержания
метгемоглобина.
Определение количественного содержания метгемоглобина в исследуемых растворах
белка осуществляли с помощью цианметгемоглобинового метода [84]. Концентрацию
метгемоглобина в форме цианметгемоглобина определяли по формуле:
( 2.4 )
Е1630 - Е2630
СMet Hb = , где
4,30 – 0,71
СMet Hb – концентрация метгемоглобина в миллиэквивалентах на литр (мэкв/л);
4,30 и 0,71 – миллиэквивалентные коэффициенты экстинкции соответственно
метгемоглобина и цианметгемоглобина при 630 нм и рН 6,8.
Содержание общего гемоглобина в форме цианметгемоглобина в мэкв/л (С)
определяли по формуле:
( 2.5 )
Е3540
Стот.Нв = , где
11,0
11,0 – миллиэквивалентный коэффициент экстинкции цианметгемоглобина при 540
нм.
Процентное содержание Met Hb рассчитывали по обычной пропорции.
Количественное определение гликозилированного гемоглобина.
Количественное содержание гликозилированного гемоглобина определяли
колориметрическим методом [43].
- Київ+380960830922