РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ, ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исходя из поставленных задач, были определены основные объекты, материалы и
методы исследования.
Объекты исследования: экспериментальные животные (белые крысы) и больные
генерализованным пародонтитом различных возрастных групп.
Материалы исследования: ткани пародонта, ротовая жидкость; лецитин подсолнечный
(пищевая добавка НПА «Одесская биотехнология»), лецитинсодержащая зубная паста
«Лецитиновая».
Методы исследования: экспериментальные, клинические, лабораторные
(биофизические, биохимические, микробиологические), функциональные,
статистические.
Объем проведенных исследований: экспериментальные исследования проведены с
использованием 317 белых крыс, в клинических исследованиях приняли участие 167
больных с хроническим течением генерализованного пародонтита I и II степени.
Проведено 3875 лабораторных и клинических анализов.
2.1. Экспериментальные исследования
Экспериментальные исследования проводились на белых крысах разных возрастных
групп (от 1-месячных до 7-месячных), получавших полноценный рацион вивария.
Исследования проведены в 2 этапа. На первом этапе изучали токсико-гигиенические
показатели и специфическую эффективность новой зубной пасты «Лецитиновая». На
втором этапе исследовали эффективность комплексного применения лецитина
(лецитина внутрь и лецитинсодержащей зубной пасты) у крыс различного возраста.
В табл. 2.1 представлена характеристика выполненных экспериментальных
исследований.
Таблица 2.1
Характеристика выполненных экспериментальных исследований
Основные параметры эксперимента
Серия и цель эксперимента
1-я
2-я
3-я
Выбор эффек-тивной дозы лецитина в составе зубной пасты
Изучение эффективности
лецитиновых препаратов
у животных разных
возрастных групп
Токсикологические испытания
Токсич-ность
Раздра-жающее действие
Сенси-били-зирую-щее дейст-вие
ост-рая
хро-ни-чес-кая
на ко-же
на сли- зис-той
Животные
Белые крысы
Возраст вначале эксперимента (мес.)
1,5
Кол-во животных
60
48
42
46
40
20*
10*
16*
13
Пол
Продолжительность эксперимента (дни)
70
60
60
60
70
30
12
Рацион животных
Полноценный
Объект исследования
Ткани пародонта, ротовая жидкость
Общий статус
Кожа и слизистая
Общий статус
П р и м е ч а н и е. * - животные использованны в эксперименте дважды, поэтому
в общее число не включены.
Перед введением в эксперименты животных взвешивали, проводили тщательный
внешний осмотр и оценивали поведенческое состояние каждой крысы. Затем
формировали группы с учетом одинакового представительства в каждой группе
разнополых особей и отклонения от средней массы животных не более 10%.
Первый эксперимент проведен на 60 одномесячных белых крысах с целью определения
специфического действия новой лецитинсодержащей зубной пасты на ткани пародонта
и выбора наиболее эффективной концентрации лецитина в составе зубной пасты.
Пародонтопротекторные эффекты зубной пасты изучали на модели спонтанного
поражения тканей пародонта [183] в соответствии с рекомендациями [43]. Всем
крысам, начиная с первого дня эксперимента, в течение 70 дней осуществляли
ежедневную тщательную чистку зубов с последующим промыванием полости рта
водой.
Было сформировано 3 группы животных (по 20 крыс в каждой группе): контрольная
и 2 опытных. В 1-й опытной группе крысам чистили зубы зубной пастой, содержащей
2% лецитина; во второй опытной группе – зубной пастой, содержащей 5% лецитина.
У животных контрольной группы использовали зубную пасту-плацебо, не содержащую
биологически активные добавки.
По окончании эксперимента у животных собирали слюну для биохимических
исследований, после чего проводили эвтаназию под рауш-наркозом методом
тотального кровопускания из сердца. Выделяли челюстные блоки с зубами для
последующих морфометрических исследований.
Далее была проведена серия экспериментов по изучению токсико-гигиенических
показателей зубной пасты «Лецитиновая».
Токсикологические исследования зубной пасты «Лецитиновая» проведены в
соответствии с требованиями Фармкомитета МЗ Украины („Методические указания по
экспериментальному (фармакологическому) и клиническому испытанию
гигиенических лечебно-профилактических средств для ухода за полостью рта”,
1994) [152] и ДержСанПін [72]. Изучали острую и хроническую токсичность,
кожно-раздражающее действие, раздражающее действие при нанесении на слизистую
оболочку полости рта, сенсибилизирующее действие и микробную загрязненность
зубной пасты (Приложение А).
Целью второго этапа экспериментальных исследований было изучение влияния
препаратов лецитина (лецитина подсолнечного и зубной пасты «Лецитиновая») как в
отдельности, так и при сочетанном применении, на ткани пародонта у крыс разных
возрастных групп.
Эксперименты проведены на 136 белых крысах 3-х возрастных групп:
1-я (48 крыс) – животные введены в эксперимент в 1-месячном возрасте, а
выведены в 3-х месячном («молодые»); 2-я (42 крысы) – введены в эксперимент в
трехмесячном возрасте – выведены в 5-ти месячном («среднего возраста»); 3-я (46
крыс) – крысы введены в эксперимент в 5-ти месячном возрасте – выведены в 7-ми
месячном возрасте («пожилые»).
Все животные находились в одинаковых условиях существования и получали
полноценный рацион вивария.
В каждой возрастной категории животные были соответственно разделены на 4
группы в зависимости от назначенной терапии:
1-я группа животных не получала никаких добавок (интактные крысы или контроль);
2-я группа – вместе с кормом получала леци