РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Организация эксперимента
Экспериментальная часть работы выполнена на 90 беспородных белых крысах-самцах
массой 150-200 г, полученных из питомника Института Гигиены и Медицинской
Экологии, Киев, фирма «Феникс».
Выбор крыс в качестве объекта исследования обусловлен тем, что эти животные
чувствительны к ограничению двигательной активности [233]. Кроме того, к
настоящему времени в литературе накоплен большой фактический материал о
структурно-функциональных изменениях различных органов и систем у этих животных
при ГК [119; 226].
Для проведения экспериментов отбирали крыс со средним уровнем двигательной
активности (СДА) и низкой эмоциональностью, определенных в тесте «открытого
поля», т.е. животных с одинаковыми конституциональными особенностями. Это
позволило сформировать однородные группы животных, одинаково реагирующих на
действие различных раздражителей. Согласно литературным данным [132; 133; 200;
249], животные со средним уровнем двигательной активности преобладают в
популяции, поэтому можно утверждать, что у них развивается наиболее типичная
реакция на действие различных факторов.
Для изучения инфрадианной ритмики физиологических процессов отобранных в тесте
«открытого поля» крыс распределяли в повторных опытах на 2 равноценные группы
по 30 особей в каждой. К первой группе относились животные, содержащиеся в
обычных условиях вивария (биологический контроль, К), вторую группу составляли
животные, двигательная активность которых ограничивалась путем помещения их в
специальные пеналы (ГК).
В данном исследовании использовали комплекс методик: флюоресцентный метод
(экскреция адреналина и норадреналина с мочой), метод Silber, Porter (1957)
[122] (содержание 11-ОКС в экскреции с мочой), цитохимические методы
определения бактерицидных систем (пероксидаза, неферментные катионные белки),
гидролитических ферментов (кислая фосфатаза, протеаза), показателей
энергетического обмена (a-глицерофосфатдегидрогеназа, сукцинатдегидрогеназа) в
нейтрофилах периферической крови крыс, косинор-анализа (анализ временной
организации физиологических процессов), статистический и кластерный анализы
(рис. 2.1).
Рис. 2.1. Схема организации эксперимента.
Примечание: ЦПС – цитохимический показатель содержания.
2.2. Оценка индивидуально-типологических особенностей животных
При оценке действия различных биологических факторов обычно проводится анализ
для «среднего животного». Такой подход позволяет выявить главные тенденции для
популяции в целом [3; 63; 78; 139; 201]. Однако при проведении опытов, целью
которых является оценка действия различных экологических факторов на животных,
всегда обнаруживается неодинаковая выраженность реакций на действие изучаемого
фактора. Установлена различная индивидуальная чувствительность человека и
животных к стрессу [3; 63; 78; 139; 123; 202; 219], в том числе и к
гипокинетическому [134; 200].
Имеющиеся в литературе данные указывают на степень выраженности
гипокинетических расстройств от типологической принадлежности животных. Данные,
полученные Л. Сантана-Вега (1991) [200], свидетельствуют о том, что у крыс с
различным уровнем двигательной активности стадия тревоги гипокинетического
стресса протекает по-разному. Эти различия касаются состояния неспецифической
резистентности, САС и ЦНС. Наиболее выраженные изменения исследуемых систем
наблюдаются у крыс с высоким уровнем двигательной активности.
В качестве метода, дающего возможность оценить поведение крыс на основе его
ориентировочного - исследовательского компонента широко используется тест
«открытого поля».
Предложенный Холлом [301] метод «открытого поля» в настоящее время применяется
в различных экспериментальных исследованиях, связанных с генетикой поведения
[133]. Этот тест (ОП) позволяет относительно быстро выявить индивидуальные
различия между животными, оценить его целостную физиологическую реакцию
животного на новую обстановку, включая элементы двигательного,
ориентировочно-исследовательского поведения [151; 227]. Согласно современным
представлениям, локомоторная активность является генетически
запрограммированным видовым признаком. Ее интенсивность влияет на формирование
и проявление важнейших морфофункциональных особенностей у видов и индивидуумов,
включая характер метаболизма и развитие физиологических систем [28].
В нашем исследовании ОП представляло собой площадку размером 80х90 см,
расчерченную на 20 квадратов, ограниченную барьером высотой 40 см. В центре
каждого квадрата находилась фишка диаметром 1 см. Во время опыта поле
равномерно освещалось лампой 200 Вт, расположенной на высоте 1 м от центра.
Крысу помещали на середину площадки и в течение двух минут регистрировали
следующие показатели: горизонтальную двигательную активность (ГДА) (число
пересеченных квадратов), вертикальную двигательную активность (ВерДА) (число
подъемов на задние лапы), частоту дефекаций и уринаций (по числу фекальных
болюсов и выделенной мочи). Дефекация и уринация рассматривались в качестве
показателей эмоциональности. В результате исследования были выделены крысы с
различным уровнем двигательной активности (табл. 2.1).
Таблица 2.1
Характеристики поведения крыс различных групп в тесте
«открытого поля» (+S)
Характеристики
выделенных
групп
Характеристика поведения
Горизонтальная
двигательная активность
Вертикальная
двигательная активность
Реакция дефекации и уринации
Низкая двигательная активность
низкая эмоциональность (1)
11,72±1,92
p1,2?0,001
p1,3?0,001
2,38±0,32
p1,2?0,001
p13?0,001
0,73±00,21
Средняя двигательная активность низкая эмоци
- Київ+380960830922