РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
2. 1. Характеристика материала исследования
Объектом нашего исследования служили черноморские мидии Mytilus
galloprovincialis Lam. Работу проводили в течение 1985–1987, 1991–1992, 1998,
2002–2003 гг. с охватом всех сезонов года (табл. 2.1).
Пробы отбирали один раз в месяц. В исследовании анализировали моллюсков с
длиной створок 30–40 мм и 40–50 мм.
В 1985–1987 гг. работу проводили в Одесском заливе у мыса Большой Фонтан в
марихозяйстве. Пробы отбирали одновременно с подвесных коллекторов (0,5–2,0 м)
и естественных субстратов (с глубины 10,5–11 м, характер грунта – ракуша,
заиленный песок). Для сравнения в 1985 г. брали мидий в районе восточного
берега Крыма, у Карадага (Кузьмичевы Камни и сваи ставника у Биостанции).
В 1991–1992 гг. исследования проводили у мыса Большой Фонтан в марихозяйстве.
Анализировали мидий с коллектора “Риф” [5, 14], с верхней (4–5 м от
поверхности), средней (6–7 м) и нижней (9–10 м) части коллектора.
В 1998 г. исследования проводили в районе мыса Ланжерон в зоне
берегоукрепительных сооружений. Пробы отбирали на пяти станциях, расположенных
в трех акваториях – А, Б и В – с разной интенсивностью водообмена (рис. 2. 1).
Станция 1 находилась в акватории А, которая окружена незатопленными волноломами
с узким входом; период водообмена в ней был самым продолжительным и составлял
12–15 ч. Станции 2 и 3 находились в акватории Б, полузакрытой заглубленным
волноломом. Период водообмена в акватории Б составлял от 3 до 6 ч. Станция 4
находилась на внешней стороне волнолома в акватории В, и в этой же акватории
находилась станция 5 – на
Таблица 2.1
Район сбора
Биотоп
Период исследования
Размер моллюсков
(мм)
Количество проб
Количество моллюсков
Одесский залив
мыс Большой Фонтан,
марихозяйство
Естественный субстрат
1985 г.
май–декабрь
30 – 40
40 – 50
75
1050
Подвесной коллектор
90
1170
Район Крыма
Естественный субстрат
1985 г.
апрель – сентябрь
30 – 40
40 – 50
69
414
Одесский залив
мыс Большой Фонтан,
марихозяйство
Естественный субстрат
1986 г.
май–декабрь
30 – 40
40 – 50
61
854
Подвесной коллектор
72
1008
Естественный субстрат
1987 г.
май–ноябрь
48
672
Подвесной коллектор
64
832
Коллектор
“Риф”
1991 г.
май–октябрь
30 – 40
40 – 50
68
952
1992 г.
май–октябрь
70
980
Одесский залив
мыс Ланжерон
Естественный субстрат
1998 г.
30 – 40
40 – 50
140
2100
Естественный субстрат
2002 г.
февраль – ноябрь,
2003 г.
март
30 – 50
1230
3930
Характеристика собранного материала
Рис. 2.1. Схема станций отбора проб в районе мыса Ланжерон [59].
опоре свайного причала. Эта опора представляет собой металлическую трубу
диаметром 0,5 м. Акватория В полностью открыта; в ней – свободный водообмен,
превышающий водообмен в акватории А в 14–15 раз [59]. Во всех акваториях у мыса
Ланжерон пробы мидий отбирали с глубины 1,0–1,5 м.
В 2002–2003 гг. продолжали исследования в Одесском заливе у мыса Ланжерон на
станции со свободным водообменом (№ 5). Для сравнения использовали материалы,
собранные на станции с ограниченным водообменом (№ 1). Пробы отбирали с февраля
2002 г. по март 2003 г., за исключением марта, мая и декабря 2002 г., января и
февраля 2003 г. Для анализа брали мидий с длиной створок 30–50 мм с глубины 1,5
м с фиолетовой окраской наружного слоя раковины – фенотип Fb, поскольку они
превалируют на небольших глубинах.
Общее представление о количестве и характере собранного материала дает таблица
2.1. Всего за время исследований было собрано и обработано 1987 проб,
включавших 13962 экземпляра моллюсков.
2.2. Методы исследования
2.2.1. О б р а б о т к а с о б р а н н о г о м а т е р и а л а. У собранных
мидий в 1985–1987, 1991–1992 гг. измеряли длину, определяли фенотип по окраске
наружного призматического слоя раковины по методике Н.М. Шуровой и В.Н.
Золотарева [116]. В соответствии с этим мидий разделяли на три фенотипа: Fa –
особи коричневого цвета без включений фиолетового пигмента, Fb – с
сине-фиолетовой окраской наружного слоя, Fc – с чередованием в наружном слое
радиальных пигментированных и непигментированных полос.
В 1985–1987, 1991–1992, 1998 гг. готовили общие гомогенаты из свежих мягких
тканей моллюсков. В 2002–2003 гг. исследовали различные органы мидий (гонады,
гепатопанкреас, жабры), у вскрытых мидий определяли пол и стадии развития гонад
по свежим мазкам под микроскопом по шкале Lubet–Valli [180, 216]. Стадия 0 –
период полового покоя. На этой стадии максимального развития в гонаде достигает
резервная ткань. Ацинусы половой железы на гистологических срезах
обнаруживаются с трудом, они мелкие и разрозненные. Из клеточных элементов в
них преобладают гонии. Пол неопределим.
Стадия I – II – гаметогенез до начала вителлогенеза. Возобновление половой
активности, период формирования и роста ацинусов. Интенсивное размножение
гониев, появление ооцитов генеративной фазы и превителлогенных ооцитов. Объем
соединительной ткани сокращается. У значительного количества ооцитов начинается
накопление запасов: основных протеинов, гликогена, липидов. Стадию I и стадию
II мы не разделяли, в связи с трудностью выявления различий между этими
стадиями на мазках. Кроме того, стадия I протекает столь быстро, что и другие
авторы объединяют ее со стадией II, так что и в литературных источниках нет
данных по содержанию резервных веществ по двум этим стадиям в отдельности.
Стадия III А – преднерестовая. Значительное увеличение объема половой железы и,
соответственно, сокращение резервной ткани. Среди клеток женской гонады
выделяются количественно и по объему ооциты, накапливающие желток. У самцов
резервная тк