РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Организация экспериментов с лабораторными животными
Экспериментальная часть работы выполнена на 485 белых беспородных крысах-самцах массой 180-250 г, полученных из питомника научно-исследовательского института биологии Харьковского национального университета им. В.Н. Каразина в течение 2004-2006 годов.
Выбор крыс в качестве объекта исследования обусловлен тем, что они обладают высокой чувствительностью к действию ЭМИ различных диапазонов [56, 163, 177] и являются удобным экспериментальным материалом при проведении исследований. Для эксперимента отбирали животных одинакового возраста, характеризующихся одинаковой двигательной активностью в тесте "открытого поля" (ОП). Подобный отбор позволил сформировать однородные группы животных с одинаковыми конституциональными особенностями, однотипно реагирующих на действие различных факторов. Экспериментальные исследования проводились на животных со средним уровнем двигательной активности (СДА) и низкой эмоциональностью, определенными в тесте ОП, которые согласно литературным данным [56, 146, 177] преобладают в популяции и поэтому можно утверждать, что у них развивается наиболее типичная реакция на экспериментальные воздействия.
Было проведено двенадцать серий экспериментов (табл. 2.1).
В первых четырех сериях экспериментальных исследований по изучению антиноцицептивного эффекта однократного и курсового действия низкоинтенсивного ЭМИ КВЧ при экспериментально вызванном болевом стрессе использовали несколько моделей болевых реакций (рис. 2.1). Это связано с тем, что регуляция болевой чувствительности обеспечивается интегративным комплексом механизмов, имеющих избирательную, динамически изменяющуюся нейрохимическую и нейроморфологическую структуру, которая определяется видом действующего фактора [28, 119].
Таблица 2.1.
Организация экспериментов с лабораторными животными
Серия экспериментовЭкспери-ментальные группыКоличе-ство живот-ных в группеБолевой тестПродолжи-тельность КВЧ-воздействияДополнительные экспериментальные воздействияI. Исследование антиноцицептивного эффекта однократного и курсового воздействия ЭМИ КВЧ при тонической боли Кф45"формалиновый тест" (ФТ)9-тикратное
30-тиминутноеМнимое воздействие ЭМИ КВЧФТ45КВЧ+ФТ45II. Исследование антиноцицептивного эффекта однократного и курсового воздействия ЭМИ КВЧ при висцеральной болиКу25"уксусный тест" (УТ)9-тикратное 30-тиминутноеМнимое воздействие ЭМИ КВЧУТ25КВЧ+УТ25III. Исследование антиноцицептивного эффекта однократного и курсового воздействия ЭМИ КВЧ при острой термической болиТГП25тест "горячая пластинка" (ТГП)9-тикратное
30-тиминутноеМнимое воздействие ЭМИ КВЧКВЧ+ТГП25IV. Исследование антиноцицептивного эффекта однократного и курсового воздействия ЭМИ КВЧ при острой боли путем электрораздраженияТЭС25тест электрости-муляции (ТЭС)9-тикратное
30-тиминутноеМнимое воздействие ЭМИ КВЧКВЧ+ТЭС25V. Сравнительное исследование аналгетического эффекта ЭМИ КВЧ и анальгинаФТ7"формалиновый тест"Однократное
30-тиминутноеМнимое воздействие ЭМИ КВЧ; анальгин (А) в дозах 4, 6, 8, 10 и 12 мг/кгКВЧ+ФТ7А4+ФТ7А6+ФТ7А8+ФТ7А10+ФТ7А12+ФТ7VI. Влияние ЭМИ КВЧ на ультрадианную ритмику болевой реакции у крысФТ32"формалиновый тест8-микратное
30-тиминутноеМнимое воздействие ЭМИ КВЧКВЧ+ФТ32ТГП32тест "горячая пластинка"КВЧ+ТГП32VII. Влияние ЭМИ КВЧ на инфрадианную ритмику болевой чувствительности у крысТЭС10тест электростимуляции40-кратное
30-тиминутноеМнимое воздействие ЭМИ КВЧКВЧ+ТЭС10VIII - XII. Изучение механизмов антиноцицептивного действия ЭМИ КВЧ в условиях блокады рецепторовФТ10"формалиновый тест"Однократное
30-тиминутноеМнимое воздействие ЭМИ КВЧ; КВЧ+ФТ10опиоидных пептидовН+ФТ10налоксон (Н) в дозе 10 мг/кг;Н+КВЧ+ФТ10серотонинаПХФА+ФТ10DL-пара-хлорфенилананин (ПХФА) в дозе 300 мг/кг;ПХФА+КВЧ+ФТ10норадреналинергической системы П?+ФТ10пропранолин (П?) в дозе 5 мг/кг, ницерголин (Н?) в дозе 1,25 мг/кг;П?+КВЧ+ ФТ10Н?+ФТ10Н?+КВЧ+ФТ10дофаминергической системы Г+ФТ10галоперидол (Г) в дозе 1,25 мг/кг;Г+КВЧ+ФТ10мелатонинаЛ+ФТ10лузиндол (Л) в дозе 5 мг/кг.Л+КВЧ+ФТ10
Рис. 2.1. Схема организации первой-четвертой серий экспериментальных исследований по изучению антиноцицептивного эффекта низкоинтенсивного электромагнитного излучения (ЭМИ) крайне высокой частоты (КВЧ).
Примечание: Кф - инъекция физраствора в дорсальную поверхность стопы; Ку - перитониальная инъекция физраствора; ФТ - инъекция 5 % раствора формалина в дорсальную поверхность стопы; УТ - перитониальная инъекция 2 % раствора уксусной кислоты; ТГП - термическое воздействие в тесте "горячая пластинка", ТЭС - тест электростимуляции; КВЧ - воздействие ЭМИ КВЧ.
Так, в первой серии экспериментальных исследований по изучению антиноцицептивного действия ЭМИ КВЧ при экспериментально вызванной тонической боли применяли "формалиновый тест" (ФТ) [236, 320]. Экспериментальных животных разделили на три равноценные группы по 45 особей в каждой (рис. 2.1). Животных первой контрольной группы (Кф) подвергали подкожной инъекции в тыльную поверхность стопы задней конечности физиологического раствора (0,9 % раствора NaCl - 0,08 мл на 100 грамм веса). У животных второй (ФТ) и третьей (КВЧ+ФТ) групп тоническую боль вызывали введением 5-%-ного раствора формалина в дорсальную поверхность стопы задней конечности. Животные третьей группы (КВЧ+ФТ) дополнительно подвергались превентивному воздействию ЭМИ КВЧ (табл. 2.1). Показателями интенсивности боли являлись частота и продолжительность болевой и неболевых (двигательная активность и пассивное поведение) поведенческих реакций в течение 90 минут наблюдения после инъекции формалина.
Вторая серия экспериментов была посвящена изучению антиноц