РАЗДЕЛ 2.
МАТЕРИАЛЫ И методы исследования
2.1. Характеристика обследованных животных
Группу наблюдения составили 117 беспородных белых крыс массой тела 150-200 г,
из них контрольную группу составили 20 (17,1%) интактных крыс, а остальные 97
(82,9%) – основную. В зависимости от объёма оперативного вмешательства основная
группа была разделена следующим образом: 1-я подгруппа - 50 крыс (42,7%),
которым выполнили гемитиреоидэктомию с интраоперационной гетеротопической
аутотрансплантацией ткани щитовидной железы. В этой подгруппе с помощью
морфологических методов изучалась динамика процессов приживления и регенерации
аутотрансплантата щитовидной железы; 2-я подгруппа - 23 крысы (19,7%) которым
выполнена тиреоидэктомия с целью моделирования послеоперационного гипотиреоза и
3-я подгруппа - 24 крысы (20,5%), которым была произведена расширенная
тиреоидэктомия с удалением паращитовидных желез с комплексной интраоперационной
гетеротопической аутотрансплантацией тканей щитовидной и паращитовидных желез.
Все оперативные вмешательства выполнялись под эфирным наркозом, что одобрено
комиссией по биоэтике (приказ №7 от 24.01.01).
В эксперименте ставили 2 задачи: изучить и доказать возможность
аутотрансплантата к приживлению, а также, при условии положительного
результата, изучить способность комплексного аутотрасплантата продуцировать
тиреоидные гормоны и паратгормон.
2.2. Методика комплексной интраоперационной гетеротопической аутотрансплантации
тканей щитовидной и паращитовидных желез в эксперименте
Крысу фиксировали в положении на спине. Под общим ингаляционным эфирным
наркозом в асептических условиях производили послойное рассечение тканей
передней поверхности шеи до претиреоидных мышц. Последние разводили тупым путём
с помощью кровоостанавливающего зажима. Мышцы с помощью лигатурных держалок
разводили в стороны. С помощью увеличительной лупы (увеличение Х 4) проводили
ревизию операционной раны. При ревизии в глубине операционной раны в продольном
направлении чётко визуализировалась трахея на протяжении 0,8-1 см и диаметром
3-4 мм. Справа и слева от трахеи и несколько кзади визуализировались 2 доли
щитовидной железы размером около 3 х 2 х 1 мм, не соединяющиеся между собой
перешейком, красно-розового цвета, мягко-элластической консистенции. С помощью
операционного микроскопа (увеличение Х 20), микрохирургического пинцета и
инъекционной иглы острым и тупым путём доли щитовидной железы выделяли из
окружающих тканей и отделяли от трахеи. При этом визуализировали паращитовидные
железы, которые располагались справа и слева от трахеи и под капсулой ЩЖ сзади,
размером около 0,5-0,8 мм, округлой формы белесоватого цвета в количестве 3-5
шт., которые выделяли вместе с долей щитовидной железы. В кивательной мышце
тупым путём формировали ложе для аутотрансплантата. Трансплантат помещали в
ложе, которое с помощью полиамидной нити синего цвета № 000 ушивали и
маркировали. Операционную рану после обработки операционного поля послойно
ушивали. Гемитиреоидэктомию у крыс в эксперименте выполняли по аналогичной
методике.
2.3. Методы исследования подопытных животных.
2.3.1. Морфологические исследования в динамике процессов приживления и
регенерации ткани ЩЖ.
Для изучения динамики процессов приживления и регенерации ткани ЩЖ из 1-й
подгруппы основной группы 30 крыс группами по 10 особей были выведены из
экспермента на 7, 14 и 28 сут., а 20 крыс - через 6 мес. после операции
согласно требованиям Ванкуверской конвенции о биомедицинских экспериментах и
комитета по биоэтике Луганского государственного медицинского университета
(приказ ректора № 7 от 24.01.01). Морфологические исследования щитовидной
железы осуществляли на базе кафедры патологической анатомии Луганского
государственного медицинского университета (научный консультант – доцент О.В.
Телешова).
Участки мышц с аутотрансплантатом выделяли острым путём. Мышечный массив с
имплантированной тканью щитовидной железы удаляли единым блоком. Материал
фиксировали в 10% нейтральном растворе формалина. Микропрепараты изготавливали
по стандартной методике парафиновой проводки и окрашивали гематоксилином и
эозином, по Ван Гизону. Готовые микропрепараты изучались в проходящем свете на
микроскопе Olympus AX70 (Япония) и описывались согласно карте микроскопического
исследования [136]. По той же методике проводили морфологические исследования
строения интактной ткани ЩЖ у крыс контрольной группы.
При проведении морфологического исследования учитывали следующие показатели:
а) характеристика тиреоидного эпителия – интрафолликулярный эпителий
(расположение, форма фолликулов, форма эпителия, высота эпителия,
характеристика ядра, характеристика цитоплазмы, десквамация эпителия в просвет
фолликулов, дистрофические и некробиотические изменения в клетках эпителия);
интерфолликулярный и экстрафолликулярный эпителий (обособленность
межфолликулярных тироцитов в виде симпластических образований, отдельных
индивидуальных фолликулярных клеток или различного размера островков, тяжей,
пролиферация интерфолликулярного эпителия в виде островков, формирование
микрофолликулов (появление коллоида с наличием предколлоидной мембраны,
характер коллоида), форма межфолликулярных тироцитов, величина, характеристика
ядер, цитоплазмы, наличие возможных дистрофических процессов;
б) характеристика эпителиальных клеток Ашкинази (онкоциты или В-клетки) –
наличие их в фолликулах или между фолликулами в виде различных скоплений и
островков;
в) С-клетки, вырабатывающие кальцитонин – наличие их в фолликулах (между
основанием тиреоидных клеток и стенкой фо
- Київ+380960830922