РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Характеристика сортов винограда, включённых в исследование
Материалом для исследования послужили сорта с окрашенной ягодой, близкие по
происхождению: 3 сорта селекции Национального института винограда и вина
“Магарач” (НИВиВ “Магарач”) – “Антей Магарачский”, “Рубиновый Магарача”,
“Гранатовый Магарача” и сорт Рубин Голодриги (НВФ «Ампелос»), а также их
родительские формы: сорта Саперави и Каберне Совиньон. Все сорта относятся к
семейству Vitaceae Juss. роду Vitis (Tournef) L. подроду Euvitis Planch. и
имеют 19 хромосом в гаплоидном наборе (2n=38). “Саперави”, “Каберне Совиньон” и
“Рубиновый Магарача” - сорта вида Vitis vinifera L. подвида Vitis vinifera
subsp. sativa D.C. Сорта Антей Магарачский, Гранатовый Магарача и Рубин
Голодриги - межвидовые гибриды (I.C), поскольку получены при скрещивании сортов
европейского вида Vitis vinifera L. и межвидовых гибридов, таких как Сейв
Виллард 20347, Магарач 6-68-27, Магарач 85-64-16, в родословной которых
присутствуют виды американской группы, такие как Vitis rupestris Sch., Vitis
lincecumss Buckl. и др. (табл. 2.1).
Сорта, включенные в наш эксперимент, - это перспективные селекционные сорта
технического направления использования, характеризу- ющиеся групповой
устойчивостью к болезням и вредителям. У сорта Рубиновый Магарача ягода с
сочной мякотью и пасленовыми тонами во вкусе. По данным селекционной схемы его
материнской формой является старый французский сорт Каберне Совиньон. В
качестве отцовской формы известен древний грузинский сорт Саперави с высоким
содержанием красящих веществ и розовым соком. Сорт Антей Магарачский
характеризуется хрустящей сочной мякотью и шоколадными тонами во вкусе, а сорт
Рубин Голодриги сочной мякотью и пасленовыми тонами во вкусе Сорт Гранатовый
Магарача, в отличие от остальных изученных селекционных сортов, имеет
окрашенный сок [5]. Более полная характеристика этих сортов представлена в
приложении А.
Таблица 2.1
Краткая характеристика сортов винограда, включенных в исследование и информация
об их родительских формах
Род, вид
Название сорта
Возможные синонимы
Цвет ягоды
Родители
Направление использования
Место получения
Авторы сортов
B = черный
AxB
W = винный
T = столовый
Vitis
I.C.
Антей Магарачский
Magarach
№ 70-71-52
Рубиновый Магарача x Магарач 85-64-16
TW
НИВ&В
“Магарач”
П.Голодрига,
В.Усатов, Л.Трошин, Ю.Мальчиков, Н.Дубовенко.
Vitis
I.C.
Гранатовый Магарача
Магарач
№ 77-81-3
B *
Антей Магарачский x Магарач 11-57-130
НИВ&В
“Магарач”
В.Усатов, Л.Киреева,
П.Голодрига, Л.Трошин и др.
Vitis
vinifera L.
Каберне Совиньон
Каберне фран x Совиньон блан
Старый французкий сорт
Неизвестны
Vitis
I.C.
Рубин Голодриги
Магарач № 15-74-29
Рубиновый Магарача x
Магарач 6-68-27
Исследователь
ская компания "Ампелос"
П.Голодрига, М.Костик,В. Юрченко, В.М.Яцков, Ю.А.Тимукин
Vitis
vinifera L.
Рубиновый Магарача
Magarach №56
Каберне Совиньон x Саперави
НИВ&В
“Магарач”
Н.Папонов, В.Зотов, П.Царёв, П.Голодрига
Vitis
vinifera L.
Саперави
B *
неизвестны
Грузинский
аборигенный сорт
Неизвестны
Примечание
1. I.C. – межвидовые гибриды. 2.* - ягода с окрашенным соком
В течение нескольких лет ведётся изучение этих сортов по ампелографическим
признакам и биохимическим показателям, а также по показателям морфогенеза в
условиях in vitro. Данные селекционные сорта представляют ценный исходный
материал для селекции и уже достаточно широко используются в селекционных
схемах. Например, сорт Антей Магарачский является родительской формой для таких
новых сортов, как Красень, Памяти Голодриги, Сафьяновый и 11 селекционных
форм.
2.2. Получение каллусных культур
В работе использованы общепринятые методики для культуры тканей в
биотехнологии, физиологии и биохимии растений [14, 42], а также методики,
разработанные специально для культуры винограда [20, 60, 177].
Для получения стерильного материала отбирали зеленые побеги у растений,
растущих in situ или - у развившихся побегов из почек 2-3-х глазковых
одревесневших черенков в лабораторных условиях и разрезали на экспланты с 1-2
междоузлиями. В стерильных условиях (в ламинарном боксе) экспланты
стерилизовали 30 секунд 70% раствором спирта, а затем 0,1% раствором диоцида в
течение 7-10 минут. Затем экспланты трехкратно промывали стерильной
дистиллированной водой. После стерилизации у вводимых эксплантов обновляли
верхний и нижний срез междоузлия и высаживали для проращивания на
модифицированную питательную среду МС для размножения [36] с добавлением 1 мг/л
БАП. В дальнейшем растения культивировали на среде с добавлением 0,25 мг/л НУК.
Образцы исследуемых сортов размножали методом микрочеренкования более 10 лет по
3-4 пересадки ежегодно. Культивирование проводили в условиях 16-часового
светового периода, освещенности 3000 лк, при температуре 24-26оС.
Для изучения пролиферации тканей использовали высечки листа и черешки, которые
разрезали на фрагменты длиной 6-8 мм, а высечки листа разрезали перпендикулярно
основной жилки на 2-3 экспланта длиной 5-10 мм и массой 24+0,5 мг. Экспланты
культивировали на модифицированной питательной среде МС (табл. 2.2). В качестве
индуцирующих каллусогенез гормональных веществ использовали 2,4-Д, НУК и БАП в
различных концентрациях.
Таблица 2.2
Состав питательной среды МС для пролиферации тканей винограда
Компоненты сред
Количество, мг/л
Макроэлементы
1/4MC
Микроэлементы
MC
Мезо-инозит
100 мг
Тиамин HCl
10 мг
Пиридоксин HCl
1 мг
Никотиновая кислота
5 мг
Сахароза
30 000 мг
Агар
7 500 мг
2,4-Д, БАП или НУК
по схеме
pH
5
- Київ+380960830922