РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Общая характеристика использованного материала, экспериментальных моделей и методов исследования
Исследования были проведены на 828 белых крысах линии Вистар обоего пола (82,1% составляли самцы) массой 160-250 г и 90 беспородных собаках (71,1% - кобели).
Животные находились в условиях вивария на обычном пищевом и световом режиме. Беспородные собаки перед использованием в эксперименте находились две недели в карантине в условиях вивария для исключения возможности использования больных животных [344]. Широкое использование белых крыс и собак связано с высокими экспериментальными возможностями этих видов животных и сопоставимостью полученных результатами с клиническим материалом [510]. Бралось во внимание и то, что белые крысы относятся к животным с весьма интенсивным обменом веществ и часто используются для исследования метаболизма нуклеиновых кислот в тканях, в том числе и в почках [60,310].
Перед операцией животных лишали пищи на 24 часа и воды в течение 3-4 часов.
Поскольку непременным следствием операций на почках все еще остается гипоксическое повреждение тканей (ишемия вследствие наложения кровоостанавливающих зажимом, лигатур и циркуляторных расстройств при раневом воспалении, реперфузионные нарушения, циркуляторно-гемическая гипоксия вследствие кровопотери и др.) [5,48,67,122] мы считает целесообразным изучение возможности коррекции кислородзависимых метаболических и репаративных процессов с помощью антигипоксантов, в том числе их целенаправленной доставке в поврежденные ткани в комплексе с ХШМ.
В качестве антигипоксантов мы использовали препараты, перечень которых представлен в таблице 2.1.
Таблица 2.1.
Препараты антигипоксического действия, использованные в экспериментах
№№
п/пНазвание препаратаПредприятие, фирма-изготовитель
1.Натрия сукцинат"Sigma", США2.Мексидол (2-этил-6-метил-З-оксипиридина сукцинат)Экспериментальный завод кардиологического НПК МЗ РФ, ООО "Наука-Центр Фарма", Москва, Россия3.Этоний (1,2-этилен - бис (N-диметилкарб-децилоксиметил) - аммония дихлорид)АО "Фармак", Киев, Украина
С целью выбора оптимального ХШМ-носителя антигипоксантов мы оценивали биологическую и фармакологическую активность хирургических нитей1, перечень которых представлен в таблице 2.2.
Таблица 2.2.
Биологические рассасывающиеся шовные материалы,
использованные в экспериментах
№№
п/пНазвание шовного материалаВид сырьяТип атравматической иглыВид стерилизацииПредприятие,
фирма-изготовитель1234561.Кетгут полированный
стерильный
баранья черева (ГОСТ 15083)режущая, фирмы "Олимп", Киеврадиационный, 25 кГрКП "Полтавский мясокомбинат" , НПП "Медар"1234562.Кетгут полированный стерильный2 свиная черева (ГОСТ 16402)режущая, фирмы "Олимп", Киеврадиационный, 25 кГрКП "Полтавский мясокомбинат", НПП "Медар"3.Кетгут полированный стерильный (йодированный)3баранья черева (ГОСТ 15083)режущая, фирмы "Олимп", КиевхимическийКП "Полтавский мясокомбинат"4.Кетгут хромированный баранья черева режущаярадиационный, 25 кГрКПХФО "Татхимфармпрепараты" (Россия)5."Биофил"4ТМО
крупного рогатого скотарежущая, фирмы "Олимп", Киеврадиационный, 25 кГрКП "Полтавский мясокомбинат" Выбор в качестве объекта исследования органов мочевыделения связан с их высокой функционально-метаболической активностью и выраженной чувствительностью (особенно почек) к гипоксическим, ишемическим и реперфузионным повреждениям [114, 240].
Комбинация показателей, которые исследовались в оперированных почках белых крыс и органах мочевыделения беспородных собак (почке, уретре), определялась с учетом максимального соответствия цели и задачам исследования. В целом, выбор комплекса методик основывался на возможности оценки окислительных и репаративных процессов в тканях. Известно, что преобладающим процессом в ходе репаративной регенерации почки является клеточная гипертрофия [9,121,271,514,550,575]. Таким образом, оценка процессов, обеспечивающих внутриклеточную регенерацию поврежденной почки и служащих структурной основой нормализации ее функции [266], представляется наиболее важной.
Для оценки состояния процессов внутриклеточной регенерации мы применяли биохимические и радионуклидные методы, позволяющие определить показатели биосинтеза РНК и белка, а также соотношение нуклеиновых кислот, использование которых является общепризнанным [121].
Для оценки состояния процессов клеточной регенерации мы применяли традиционные морфологические и морфометрические методы, широко используемые при исследовании репаративных процессов в паравульнарных тканях органов мочевыделения [280,247,337].
В связи с тем, что устойчивость к гипоксии и активность репаративных процессов в высокой степени связана с энергетическим обеспечением [108,201,428], мы исследовали общепринятые [113] показатели энергетического обмена (концентрацию и соотношение адениннуклеотидов в сшитой ткани, а в экспериментах на белых крысах, кроме того, полярографически определяемые скорости митохондриального дыхания в метаболических состояниях 3 и 4 по Чансу, дыхательный контроль и коэффициент эффективности фосфорилирования АДФ/О).
Для оценки состояния процессы СРПО в поврежденных тканях оценивали источники активных форм кислорода, в частности супероксидного анион-радикала, в тесте с нитросиним тетразолием (НСТ). Так, спектрофотометрическим НСТ-тестом можно оценить продукцию супероксидного анион-радикала в гомогенате ткани с индукторами в виде НАДН, НАДФН и бактериальными липополисахаридами.
Метод позволяет оценивать общую фоновую нестимулированную продукцию супероксидного анион-радикала, его генерацию митохондриальной и микросомальной электронно-транспортными цепями, а также при дыхательном взрыве лейкоцитов [131,329]. Наряду с этим определяли уровень динитрозильных комплексов железа (ДНКЖ), считающихся "депо" окси