ГЛАВА 2
МЕТОДЫ И МЕТОДИКИ ОБСЛЕДОВАНИЯ И ЛЕЧЕНИЯ НАБЛЮДАВШИХСЯ СУПРУЖЕСКИХ ПАР
Измерение базальной температуры
Температура измеряется каждое утро после не менее 4-х часов сна в момент пробуждения, не вставая с постели, примерно в одно и то же время. Градусник вводится в прямую кишку на глубину около 5 см. Через 4-5 минут результат измерения температуры отмечается в меноциклограмме с точностью до десятых долей градуса.
При интерпретации полученных данных базальной температуры тела различают следующие 5 основных типов [20]:
1 тип - нормальный двухфазный цикл; подъём температуры во вторую фазу цикла на 0,4°С и более; имеется "овуляторное" и "предменструальное" падение температуры.
П тип - недостаточность функции жёлтого тела: слабо выраженный подъём температуры тела во вторую фазу (0,2 - 0,3°С), цикл, как правило, двухфазный.
Ш тип - укорочение и недостаточность второй фазы: температура повышается незадолго перед менструацией, вторая фаза короче 10 дней, нет "предменструального" падения температуры.
1У тип - ановуляторный цикл: менструальный цикл однофазный, монотонная температурная кривая.
У тип - выраженная эстрогенная недостаточность: отмечаются небольшие размахи температуры, нет заметного подъёма во вторую фазу, график не укладывается в предыдущие 4 типа; может быть следствием неправильного измерения температуры или от случайных причин.
Ультразвуковое сканирование внутренних
половых органов
Эхографическая диагностика внутренних половых органов производилась с помощью ультразвукового аппарата фирмы "Aloka-SSD 1100", работающего в реальном масштабе времени.
При исследовании развития фолликула, прежде всего, рекомендуется получить поперечную сканограмму. После идентификации матки тщательно обследуются участки придатков с каждой стороны. Фолликулы яичника определяются в виде небольшой круглой или овальной кисты.
Для оценки толщины и ультразвуковой картины эндомет-рия проводилась трансвагинальная сонография. Трансвагинальное сканирование выполнялось на обычном гинекологическом кресле, использование которого в качестве манипуляционного стола является наиболее приемлемым. Одним из важных условий подготовки женщин к трансвагинальнгой эхографии является опорожнение мочевого пузыря. С целью исключения воздушной прослойки поверхность датчика покрывается акустическим гелем [403]. При исследовании эндометрия мы оценивали размер срединного маточное М-эхо в передне-заднем направлении с учётом его структуры, формы и контуров. Полученные данные сопоставляли со стадией менструального цикла и гормональным профилем женщины.
Гистеросальпингография
Гистеросальпингографию применяли для определения проходимости маточных труб, рельефа слизистых оболочек матки и труб, возможных аномалий и пороков развития и т.д.
Оптимальный срок для проведения исследования 11-21 день менструального цикла в расчёте на 28-дневный менструальный цикл.
Исследование проводили при условии нормального клинического анализа крови, нормальной температуре тела и 1-2 степени чистоты влагалищного содержимого.
В условиях асептики и антисептики шейку матки фиксировали пулевыми щипцами. Обязательно создавали плотное соприкосновение между маточным наконечником и стенками канала шейки матки.
Для проведения гистеросальпингографии использовали водорастворимые препараты (верографин, урографин, ультравист), которые в отличие от масляных растворов быстро всасываются из брюшной полости и маточных труб, не вызывая образования воспалительных гранулём и других осложнений. После введения контрастного вещества производят сразу же рентгенографию; при необходимости снова вводят контрастное вещество и процедуру повторяют до получения чёткой рентгенологической картины.
Иммуноферментные методы исследования
Для изучения гормонального профиля организма в сыворотке крови на 8-10-й день цикла определяли ЛГ, ФСГ, пролактин, эстрадиол, тестостерон; на 18-20-й день менструального цикла - прогестерон, эстрадиол и кортизол с использованием стандартных планшетных наборов фирмы "Biorad" на иммуноферментном анализаторе фирмы "Multiscan". Для исследования уровня пролактина забор крови проводили всегда натощак.
Изучение иммунного статуса организма
Популяционный и субпопуляционный состав иммунокомпетентных клеток крови оценивали методом непрямой иммунофлюоресценции с использованием моноклональных антител.
Лимфоциты из гепаринизированной крови выделяли центрифугированием на градиенте фиккол-верографина (плотность 1,077 г/мл). 1-0,1 млн лимфоцитов в объёме 50 мкл вносят в центрифужные пробирки, добавляют 5 мкл тестируемого моноклонального антигена и инкубируют 30-45 мин. при +4°С. Далее добавляется 150 мкл раствора Хенкса и смесь центрифугируют 5 мин.; супернатант удаляют и добавляют 50 мкл раствора Хенкса; клетки суспендируют, добавляют ещё 150 мкл раствора Хенкса и центрифугируют в течение 5 мин. Снова удаляют супернатант и к осадку отмытых клеток добавляют 50 мкл F(ab)2-фрагментов овечьих антител к Ig мыши, меченных ФИТЦ и разведённых 1:100. Для разведения используется физраствор, забуференный фосфатами, содержащий 0,5% желатины и 0,1% азида натрия. Клетки суспендируют и инкубируют 30 мин. при +4°С. Клетки ещё 2 раза отмывают раствором Хенкса и центрифугируют. После этого клетки готовы для иммунофлюоресценции.
Окрашенные клетки просматриваются на иммунофлюоресцентном микросокопе, для чего их предварительно суспендируют и приготовленный препарат просматривается под иммерсией на флуоресцентном микроскопе. Наблюдение проводится в затемнённом помещении. Количество антигенпозитивных клеток определяют как % флуоресцирующих клеток при просматривании 200 лимфоцитов за вычетом % флуоресцирующих клеток, наблюдаемых в препарате отрицательного контроля. В качеств