РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
В работе исследовались эпоксидно–диановые смолы марок ЭД–20 (ГОСТ 10587–84) и
Э–40 (ОСТ 6–10–416–77), их наиболее опасный в токсикологическом отношении
компонент – ЭХГ и его метаболит – 3–хлор–1,2–пропандиол.
В эксперименте использовано 4147 животных, в том числе 1325 белых беспородных
крыс, 2647 крыс линии Вистар, 96 белых беспородных мышей и
79 мышей линии BALB/с. Все животные были половозрелые, обоего пола с массой
тела 160-240 г – крысы и 19-28 г - мыши. В опыт животные брались после
прохождения карантина в течение 20–25 дней [37].
Методические принципы и приемы, используемые в подготовительном периоде
постановки эксперимента, выполнены в соответствии с существующими
рекомендациями и указаниями [256, 257], а также с учетом Правил доклинической
оценки безопасности фармакологических средств (GLP) [258]. Животные находились
в условиях вивария ЛГМУ и получали стандартную диету в виде гранулированного
корма по установленным нормам. Доступ к воде был свободным.
Забой животных осуществляли путем декапитации в соответствии с «Методическими
рекомендациями по выведению животных из эксперимента» [256].
Результаты токсикологических исследований оценивали в соответствии с критериями
ГОСТ ССБТ «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности»
(12.1.007–76).
Интоксикацию вызывали путем ингаляционного воздействия и введения исследуемых
веществ в желудок. Все затравки проводились натощак в одно и то же время суток
– в 10 часов утра.
При изучении токсичности исследуемых веществ в острых опытах учитывали динамику
гибели животных в течение 14 дней и клиническую картину отравления.
Токсикометрические параметры изучаемых веществ рассчитывали с помощью метода
наименьших квадратов для пробит–анализа кривых летальности [259], а также
экспресс–метода [260] и метода «одной точки» по Van der Vaerden [261].
Ингаляционную затравку лабораторных животных (белых крыс) летучими компонентами
ЭС осуществляли динамическим способом при 4–х часовой экспозиции [7, 49, 261] в
нашей модификации. При этом использовали воронку с микропористой стеклянной
пластинкой [49] либо вибрирующим пористым элементом [262], дробившим струю
подаваемого воздуха на части и обеспечивавшим более интенсивный барботаж. Для
усиления насыщения воздуха парами ЭС применялось разработанное нами распыляющее
устройство [263], а также испаритель компонентов ЭС с непрерывной подачей
вещества [264].
Концентрации летучих продуктов в воздухе затравочной камеры регулировались за
счет изменения навески исследуемого вещества, температуры нагрева и режима
воздухообмена.
Концентрацию ЭХГ в камере в мг/м3 определяли по формуле:
Х = аЧв/бЧV0,
где а - количество вещества в мкг, определяемое по калибровочной кривой;
в - объем пробы, мл;
б – объем пробы, взятой для анализа, мл;
V0 – объем воздуха в литрах, отобранный для анализа, приведенный к нормальным
условиям:
V0 = VtЧ273ЧP/(273+t)Ч760,
где Vt – объем воздуха при температуре t в месте отбора пробы;
Р – атмосферное давление.
Учитывая, что поступление летучих компонентов ЭС в камеру концентрация ЭХГ
нарастает экспоненциально, то время, необходимое для достижения 99% (t99)
равновесной концентрации, рассчитывалось исходя из уравнения [265]:
C = (щ/b) [1-exp(-bt/a], C/(щ/b) = 1 - exp(1bt/a), 0,99 = 1 - exp( -bt99/a),
t99 = 4,6052a/b, tx=Ka/b,
где С – концентрация ЭХГ на время t;
щ – количество ЭХГ, вводимого в 1 мин;
а – объем камеры;
b – поток воздуха в камеру;
х – соответствует проценту номинальной концентрации, создаваемой за время t;
К – коэффициент, рассчитанный для различных равновесных концентраций.
Концентрации паров ЭХГ в воздухе затравочной камеры определялись
3–5 раз с различным интервалом времени от начала воздействия по методу [266].
Итоговая величина действующей концентрации паров ЭХГ в камере за период
4–часовой затравки выражалась как средневзвешенная во времени.
Для смолы ЭД–20 содержание ЭХГ в воздухе затравочных камер колебалось в
пределах 169,0–587,1 мг/м3, Э–40 – 193,1–608,9 мг/м3. Токсикометрические
параметры ЭХГ изучались на белых крысах–самцах в условиях 30–минутной
статической ингаляционной затравки по методике В.Д. Лукьянчука [251].
Концентрация яда в камере составляла 10,4–27,8 мг/л.
Для определения ЛД50 ЭС при их внутрижелудочном введении, смолы предварительно
подогревались до температуры 35–370С, при необходимости смешивались с
подсолнечным маслом в соотношении 1:2 или 1:3 [49] и вводились в виде эмульсии
в дозах от 4,0 до 8,8 г/кг массы. При изучении сравнительной токсичности ЭХГ и
его метаболита 3–хлор–1,2–пропандиола, эти вещества вводились перорально в виде
1–5% растворов в дозах 80,0–180,0 мг/кг и 200,0–500,0 мг/кг соответственно. На
каждую дозу либо концентрацию было испытано по 6 или 8 животных.
Для определения порога острого (Limac) и порога специфического (Limsp)
общетоксического действия ЭС были выбраны интегральные показатели,
характеризующие общее состояние животных, а также специфические показатели
функционального состояния печени и мочевыделительной системы. При выборе
показателей для определения Limac учитывались данные о характере действия
эпоксидных соединений на организм [49, 5]. Сразу же после 4–часовой затравки у
животных регистрировали ректальную температуру тела при помощи
электротермометра ТПЭМ–1 и содержание SH–групп в цельной крови [49]. Для
изучения влияния ЭС на функцию печени определяли относительную массу печени,
активность АлАТ в сыворотке крови [267] и длительность выделения БСФ с желчью
[268, 269]. О функции почек судили по величине суточного диуреза, концентрации
мочевины в крови и хлоридов в моче [БИО–ЛА–ТЕС
- Київ+380960830922