РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ, ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исходя из поставленных задач, были определены основные объекты, материалы и
методы исследования.
Объекты исследования: экспериментальные животные (белые крысы), лица с
интактным пародонтом и больные генерализованным пародонтитом I-II степени.
Материалы исследования: ткани пародонта, ротовая жидкость; гидроксиапатит
(Остеопатит биологический), зубная паста с остеотропным эффектом «Гарант»,
полиминеральный комплекс Кальцид-Магний.
Методы исследования: экспериментальные, клинические, рентгенологические,
лабораторные (биофизические, биохимические), статистические.
Объем исследований: экспериментальные исследования проведены с использованием
128 животных; в клинических испытаниях приняло участие 110 человек. Проведено
7452 лабораторных и клинических анализов.
Для получения репрезентативных данных исследования проведены в эксперименте на
белых крысах и в клинике у больных генерализованным пародонтитом с
использованием объективных показателей, характеризующих общий пародонтальный
статус, состояние альвеолярной кости и минерального обмена в полости рта, а
также факторов, обуславливающих развитие патологических процессов в тканях
пародонта (состояние перекисного окисления липидов и системы антиоксидантной
защиты).
2.1. Общая характеристика проводимых исследований
Экспериментальные исследования проводились на белых крысах линии Вистар
стадного разведения, получавших стандартный рацион питания.
Перед введением в эксперимент животных взвешивали, проводили тщательный внешний
осмотр и оценивали поведенческое состояние каждого животного. Затем формировали
группы с учетом одинакового представительства в каждой группе разнополых
особей и отклонения от средней массы животных не более 10%.
Крысы находились в эксперименте 70 дней (1-й эксперимент) и 56 дней (2-й
эксперимент). По окончании опыта у них собирали ротовую жидкость. Затем
проводили эвтаназию под рауш-наркозом методом тотального кровопускания.
Выделяли зубо-челюстные блоки и бедренную кость для дальнейшего изучения.
В биологических объектах (ротовая жидкость, сыворотка крови, альвеолярная и
бедренная кость) с помощью биохимических методов определяли показатели,
характеризующие состояние минерального обмена: содержание кальция и
неорганического фосфора [107]. В альвеолярной кости изучали степень
деструктивных изменений морфометрическим методом [143].
Токсикологические показатели созданной зубной пасты «Гарант» оценивали,
соргласно требований ДержСанПін [55] и Фармкомитета МЗ Украины [128] (см.
Приложение А).
В клинических исследованиях приняли участие больные генерализованным
пародонтитом I-II степени в возрасте от 31 до 60 лет, которые отличались по
клиническому варианту течения заболевания (прогрессирующий и
медленнопрогрессирующий (адапт. по Самойленко А.В., 2003 [184]), а также по
наличию или отсутствию сопутствующей системной патологии организма. В
отдельную группу были выделены также женщины, которые находились в состоянии
физиологической или хирургической (после овариоэктомии) менопаузы. Регистрация
показателей, характеризующих состояние пародонта в процессе применения
комплекса гигиенических и остеотропных средств, проводилась до лечения, после
основного курса лечения, через 6 и 12 месяцев после лечения.
Лабораторные исследования у больных включали изучение функционального
состояния слюнных желез (скорость слюноотделения, рН и буферную емкость слюны)
[107] и биохимический анализ ротовой жидкости, а именно определение
интенсивности процессов ПОЛ (по уровню МДА [196] и состояния АОС по активности
антиоксидантных ферментов – СОД [225], глютатионредуктазы [171] и
глютатионпероксидазы [157, 181], а также содержания основных минеральных
элементов – кальция, фосфора и магния [107] и активности щелочной фосфатазы
[103, 248].
2.2. Методы исследования
2.2.1. Экспериментальные методы исследования.
Характеристика использованных в эксперименте животных представлена в табл.
2.1.
Таблица 2.1
Основные параметры экспериментальных исследований и характеристика
использованных животных
Серия и цель эксперимента
Животные
Кол-во живот-
ных
Пол
Возраст
в начале экспери-мента
Продолжи-тельность экспери-мента
Модель остеодест-рукции альвеоляр-ной кости
Диета
1-я
Изучение влияния зубной пасты на степень резорбции альвеолярной кости
Белые крысы
48
30 ±1 день
70 дней
Возрастная атрофия
Стандарт-ный рацион
2-я
Оценка влияния остеотропых средств на альвеолярную кость в сравни-тельном
аспекте при спонтанной и обусловленной системным остеопо-розом атрофии
Белые крысы
80
30 ±1 день
56 дней
Системный остеопороз
Добав-ление
в пищу
трилона Б
Модель системного остеопороза получали путем введения в рацион трилона Б
(ЭДТА), вызывающего в организме разбалансирование белково-минерального обмена с
остеопоротическими изменениями в костях [113]. Животные ежедневно, в течение 56
дней, с пищей получали трилон Б из расчета суточного потребления до 1 г на 1
животное.
Степень атрофии альвеолярной кости определяли по методу А.В. Николаевой [143].
После эвтаназии у животных вычленяли челюстные блоки, отмывали в 10%-ой
перекиси водорода, высушивали, фиксировали и под бинокулярной лупой, в окуляр
которой вставлена шкала с ценой деления 0,1 мм, определяли степень атрофии
кости альвеолярного отростка челюстей. Выражали в %.
Таблица 2.2
Объем экспериментально-лабораторных исследований
Исследуемые показатели
Количество животных
Объект исследований
Морфологические
128
Альвеолярный отросток нижней челюсти
Биохимические:
содержание кальция, фосфора.
- Киев+380960830922