ГЛАВА 2
ОБЪЕКТ И МЕТОДИКА
2.1. Объект исследования
Экспериментальная часть работы была выполнена на 50 здоровых молодых белых
крысах самцах линии Wistar массой 240–280 г. Выбор животных продиктован
особенностями методологического подхода к решению поставленных цели и задач.
Количество животных, на которых проводились эксперименты, определяли с учетом
статистического критерия достоверности.
Содержание крыс и уход за ними (включая анестезиологическое обеспечение и
эвтаназию) осуществляли согласно имеющимся приказам, регламентирующим
организацию работы с использованием экспериментальных животных и соблюдением
принципов «Европейской конвенции о защите позвоночных животных», которые
используются для экспериментальных и других научных целей (Страсбург, 1985), а
также решения Первого национального конгресса по биоэтике (Киев, 2001) (акт
проведения экспертизы прилагается).
Исходные данные определяли у 10 крыс (группа К) (см. табл. 2.1). Изучали
функциональные и морфологические показатели: электрокардиографические (ЭКГ)
исследования; определение проницаемости гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) в
коре больших полушарий головного мозга (ГМ), для чего изучали экспозиционную
динамику сорбции (ЭДС) нейтрального красного; определение содержания воды
(гидратации) в мозговой ткани коры больших полушарий ГМ; гистологические
исследования коры больших полушарий ГМ (для стереометрических исследований) и
сердца; электронномикроскопические исследования нейроцитов и капилляров коры
больших полушарий ГМ; стереометрические исследования плотности распределения
нервных клеток в коре больших полушарий ГМ; определение активности каталазы в
коре больших полушарий ГМ животных; измерение внутрикожного напряжения
кислорода (РО2); статистические исследования.
Таблица 2.1
Количественное распределение животных согласно функциональным и морфологическим
методам исследования
Методы исследования
Количество крыс
К1
ГТ
НМ1
НМ2
Запись и анализ ЭКГ
Измерение РО2
Определение проницаемости ГЭБ
Определение гидратации
Гистологические исследования
Электронномикроскопические исследования
Стереометрические исследования
Определение активности каталазы
Итого:
10
30
10
20*
Всего:
50
Примечание: а) К1 – контрольная группа (группа К); ГТ – гипоксическая
тренировка (группа ГТ); ИМ1 – моделирование некроза миокарда у интактных
животных (группа НМ); ИМ2 – моделирование некроза миокарда после ГТ (группы
ГТ+НМа, ГТ+НМ*а и ГТ+НМб); «+» – исследование проведено у всех крыс; «±»
исследование проведено у части животных (подробно в тексте); * – животные
учтены в ГТ.
Опытную группу составили 40 крыс (см. табл. 2.1), которые были распределены в
четырех сериях экспериментов.
У животных первой серии (группы ГТ – 10 крыс) изучали функциональные и
морфологические показатели после ежедневной ГТ ( см. табл. 2.1).
У животных второй серии (группа НМ – 10 крыс) изучали функциональные и
морфологические показатели после моделирования некроза миокарда (см. табл.
2.1).
У животных третьей серии группа (ГТ+НМа – группа погибших животных при
моделировании 6-часового некроза миокарда, ГТ+НМ*а – группа животных, которые
не погибли при моделировании 6-часового некроза миокарда – 10 крыс) изучали
функциональные и морфологические показатели при моделирования некроза миокарда
сразу после окончания ГТ (см. табл. 2.1).
У животных четвертой серии (группа ГТ+НМб – 10 крыс) изучали функциональные и
морфологические показатели после моделирования некроза миокарда через 24 часа
после окончания ГТ (см. табл. 2.1).
2.2. Методика исследования
2.2.1. Гипоксическая тренировка. Для ГТ животных помещали в специально
разработанное устройство (рационализаторское предложение №151205/05 от
15.12.2005 г.), которое было собрано из трех основных блоков (см. рис. 2.1).
Первый блок – герметическая емкость, которая имела два трубопровода, снабженных
клапанной системой, предотвращающей обратное поступление воздушной смеси.
Избыток газовой смеси выводили через выходной трубопровод, который был снабжен
обратным клапаном. Контроль давления газовой смеси контролировали по показаниям
водного манометра (см. рис. 2.1). Через входной трубопровод в емкость поступала
газовая смесь с содержанием кислорода 10,5–12 %. Газовую смесь изготовляли с
помощью ротаметрического манометра наркозного аппарата «Наркон-П», который
представлял второй блок устройства. Дозирование газовой смеси осуществляли
инжектором и ротаметрическим манометром. Для этого газообразный азот,
поступающий через редуктор из газового баллона (третий блок устройства),
смешивался с атмосферным воздухом в пропорции 1:1.
Контроль тканевой гипоксии осуществляли транскутанным оксигемометром Radiometer
TCM-2 (Дания).
Предложенное устройство для ГТ экспериментальных животных позволяет создать в
герметической емкости газовую смесь с концентрацией кислорода 10–12 %.
Гипоксическую тренировку осуществляли по следующей методике (рационализаторское
предложение № 151206/05 от 18.12.2005 г.): ежедневно на 60 минут животных
помещали в герметическую емкость, в которой поддерживалась газовая среда с
заданной концентрацией кислорода (см. рис. 2.1). В первые 6 суток проводили
постепенную адаптацию крыс к гипоксии путем увеличения экспозиции ГТ от 10 до
60 мин. В первые сутки животных содержали в гипоксической среде 10 мин. На
вторые сутки – 15 мин. На третьи сутки – два раза по 20 мин. с пятиминутным
перерывом. На четвертые – 45 мин. (20 и 25 мин. с пятиминутным перерывом). На
пятые сутки – 50 мин. и на шестые сут
- Киев+380960830922