ГЛАВА 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Работа выполнена на базе областного центра реабилитации детей, пострадавших от
аварии на ЧАЭС, лаборатории клинической иммунологии института охраны здоровья
детей и подростков АМН Украины и кафедре молекулярной и прикладной биофизики
Харьковского национального университета.
Под наблюдением находилось 300 детей в возрасте 6-9 лет, родившихся и постоянно
проживающих в городе Харькове.
Основную группу составили 200 детей, отцы которых принимали участие в
ликвидации аварии на Чернобыльской АЭС. Доза облучения отцов составила 7-71
сЗв.
Группу сравнения составили 100 детей Харьковских школ (популяционный срез).
Для получения нормативных величин иммунологических показателей было обследовано
30 практически здоровых детей того же возраста, родившихся от родителей, не
подвергавшихся воздействию вредных факторов окружающей среды.
Оценка состояния здоровья детей проводилась на основании комплексного
клинико-инструментального исследования. Изучались особенности
онтогенетического развития, частота и выраженность основных клинических
синдромов.
При объективном обследовании обращали внимание на физическое развитие, наличие
или отсутствие хронических заболеваний и врожденных пороков развития.
Физическое развитие оценивали с учетом возраста, пола путем сравнения
ростовесовых показателей с линейными диаграммами, разработанными в ИОЗДП АМН
Украины [104].
Кроме общеклинических исследований, включавших клинические анализы крови и
мочи, проводилось ультразвуковое исследование сердца, органов брюшной полости
и щитовидной железы, функциональное исследование сердечно-сосудистой системы.
Все больные консультированы психоневрологом, окулистом, отоларингологом,
эндокринологом, стоматологом, гематологом, гинекологом.
При постановке диагнозов пользовались МКБ-10 [122].
Материальный уровень семьи оценивали как высокий, средний и низкий в
зависимости от ответа про достаточность денег в целом, только на питание или
недостаточность в связи с большими тратами на лечение.
Жилищные условия считались хорошими, если семья проживала в изолированной
квартире; удовлетворительными, если семья проживала в изолированной квартире
без соблюдения санитарно-гигиенических норм жилой площади на человека;
неудовлетворительными, если семья занимала площадь в коммунальной квартире.
Программа иммунологического исследования включала изучение Т- системы,
В-системы, фагоцитарного звена иммунитета, исследование физико-химических
свойств мембран иммунокомпетентных клеток, состояние процессов перекисного
окисления липидов и антиоксидантной системы клеток.
Кровь для иммунологических исследований брали из локтевой вены утром натощак.
Выделение мононуклеарных клеток осуществляли на градиенте фиколл-верографина
(1,077) [72].
Количественное содержание Т-лимфоцитов (CD3+), их субпопуляций (CD4+ и CD8+) и
В-лимфоцитов (СD19+) определяли методом непрямой мембранной
иммунофлюо-ресценции с помощью моноклональных антител СD3+, СD4+, СD8+, СD 19+
(НПЦ ''МедБиоСпектр'', Москва) соответственно [181].
Численность Т-активной субпопуляции лимфоцитов определяли в реакции
розеткообразования с эритроцитами барана [227].
О нарушении экспрессии рецепторов на ИКК судили на основании повышения
процента Е-РОК и СDЗ+клеток в суспензии лимфоцитов после их инкубации с РНКазой
Bi в концентрации 10-4 [103].
Для суждения об активности рецепторного аппарата иммунокомпетентных клеток
использовали морфологический показатель аффинности (МПА) [200]. С этой целью в
каждом мазке подсчитывали 100 лимфоцитов с различным количеством фиксированных
на их мембране эритроцитов. В 0-ю группу относили свободные лимфоциты, в 1-ю
группу - лимфоциты с тремя эритроцитами в розетке, во 2-ю - лимфоциты,
присоединившие более чем три эритроцита, в 3-ю - полные розетки. Порядковый
номер группы умножали на число составляющих ее лимфоцитов. Результаты
произведений этих групп суммировали и сумму делили на количество
розеткообразующих клеток. Полученная в результате деления величина и
составляла МПА.
О функциональной активности иммунокомпетентных клеток судили по уровню
спонтанной пролиферации лимфоцитов и интенсивности пролиферации лимфоцитов под
влиянием ФГА [182]. Учет реакции проводили по включению радиоактивной метки
(Н3-тимидина) в клетки. Индекс стимуляции клеток в РБТЛ (ИС (РБТЛ))
рассчитывали по формуле:
радиоактивность культуры с ФГА, имп\мин
ИС (РБТЛ) =
радиоактивность культуры без ФГА, имп\мин
Блокирующую активность аутосыворотки оценивали по величине подавления
бласттрансформации лимфоцитов с ФГА без и в присутствии аутосыворотки [64].
Индекс подавления реакции (ИП (РБТЛ)) аутосывороткой (а\с) рассчитывали по
формуле:
(индуцированная БТЛ без а\с- спонтанная БТЛ без а\с), имп\мин
ИП (РБТЛ) =
(индуцированная БТЛ с а\с - спонтанная БТЛ с а\с), имп\мин
Содержание сывороточных иммуноглобулинов G, A, M ( Ig G, А, М) и секреторного
иммуноглобулина А (sIg A) в слюне определяли спектрофотометрическим методом с 7
% ПЭГ с использованием моноспецифических сывороток против иммуноглобулинов
человека [195].
Концентрацию циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) и их размеры (ЦИК Конст.)
определяли методом селективной преципитации с ПЭГ-6000 [174].
Гемолитическую активность комплимента (ГАК) определяли по методу Chudomel в
модификации Кондрашовой [90].
Антитела к нативной, денатурированной температурой и формалином ДНК, антитела к
тиреоглобулину и микросомальному антигену определяли методом иммуноферментного
анализа с использованием наборов ЧП "Модифас" (Харьков
- Київ+380960830922