РОЗДІЛ 2
МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
2.1. Бактерії, поживні середовища, імунобіологічні препарати та хімічні
реактиви, використані при проведенні досліджень
Об’єктом дослідження були: штами бактерій різних таксономічних груп, у
відповідності із 9-м виданням “Bergeys’s Determinative of Bacteriology” (1994
p.): група 17 грампозитивні коки - 18 штамів Staphylococcus aureus subsp.
aureus, та група 5, факультативно анаеробні грамнегативні палички - 51 штам
Salmonella choleraesuis subsp. choleraesuis. 17 культур S. aureus subsp. aureus
були ізольовані фахівцями Лозівської районної СЕС (Харківська обл.) МОЗ України
в січні 1998 р. від хворих людей і медичних працівників в період епідемічного
ускладнення в зв’язку із спалахом шпитальної гнійно-септичної інфекції (ГСІ) в
Лозівській районній лікарні МОЗ України. За своїм походженням штами
стафілококів згруповано у три групи: 9 культур (із ідентифікаційними номерами -
№№ 543, 548, 553, 555, 568, 569, 579, 581, 658) ізольовано в пологовому
відділенні; 5 культур (із №№ 733, 743, 744, 751, 758) – у відділенні анестезії
і реанімації; 3 культури (із №№ 276, 291, 295) – в ЛОР відділенні. В якості
еталонного (типового) використовували штам S. aureus subsp. aureus АТСС 25923,
отриманий із музею мікроорганізмів ІМІ ім. І.І. Мечникова АМН України. Культури
S. choleraesuis subsp. choleraesuis були такого походження: (із №№ 1905, 1915,
1956, 1984, 2192, 2520, 2525, 2631, 2646, 2651, 2909, 2918, 2942-I, 2942-II,
2861) 15 штамів (група А) були виділені фахівцями Харківської обласної
клінічної інфекційної лікарні № 22 МОЗ України в червні-серпні 1998 р. від
хворих людей при спорадичній захворюваності на гостру кишкову інфекцію (ГКІ);
35 штамів (група Б) ізольовані фахівцями Золочевської районної та Харківської
обласної СЕС МОЗ України під час спалаху харчової токсикоінфекції –
сальмонельозу в дитячому оздоровчому таборі “Берізка” (Золочевський р-н,
Харківська обл.) в червні 2003 р., в т.ч. 27 штамів (підгрупа Б1, штами із №№
125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 141, 143, 145, 147, 153, 155, 157, 159,
161, 163, 165, 167, 169, 171, 1802, 1803, 1805, 1806, 1829) виділено від хворих
дітей та обслуговуючого персоналу і 8 культур (підгрупа Б2, штами із №№ 102,
106, 115, 117, 119, 121, 123, 209) виділено із об’єктів оточуючого середовища
(харчових продуктів, обладнання харчоблоку, стічної води). В якості типового
використовували штам S. choleraesuis subsp. choleraesuis ATCC 13076, отриманий
із музею мікроорганізмів ІМІ ім. І.І. Мечникова АМН України.
Основні поживні середовища для вирощування стафілококів і сальмонел:
м’ясо-пептонний бульйон (МПБ), м’ясо-пептонний агар (МПА); агар Ендо,
вісмут-сульфіт агар (ВСА), агар для культивування стафілококів (МЖСА –
молочно-жовточно-сольовий агар або ЖСА – жовточно-сольовий агар) виробництва
НАН України ІБОНХ Державного експериментального заводу медичних препаратів (м.
Київ) та НВО “Питательные среды” (м. Махачкала, РФ). При визначенні чутливості
мікроорганізмів до дії антибіотиків використовували агар АГВ виробництва
Державного експериментального заводу медичних препаратів (м. Київ). Інші
агаризовані середовища готувались із використанням агарової основи фірм “Difco”
(США), “Oxoid” (Великобританія). Цукри, спирти, амінокислоти з позначенням
“РЕАХИМ” виробництва Шосткінського заводу хімреактивів, Київського заводу
“РИАП”, Центру хімічних досліджень “САН” (Словакія), фірм “Raanal” (Угорщина),
науково-виробничої фірми “СИНБИАС” (Україна). Системи для ідентифікації
мікроорганізмів родини Enterobacteriaceae індикаторні паперові “СИБ”
виробництва Горьківського НДІ епідеміології і мікробіології МОЗ РФ та
“ЕНТЕРО-тест” 1, 2 ВО “LaСhema” (Чехія). Хімічні реактиви з кваліфікацією не
нижче ЧДА, ХЧ: солі, кислоти, луги з позначкою “РЕАХИМ” виробництва
Славногорського хімзаводу ім. Г.С. Верещагіна, Новочеркаського заводу
синтетичних продуктів, Олайського заводу хімреактивів, фірм “LaСhema” (Чехія),
“Sigma Chemical Co.” (США), “СИНБИАС” (Україна). Сальмонельозна адсорбована
О-сироватка полівалентна груп А, В, С, D, E суха та сальмонельозна адсорбована
О-сироватка полівалентна рідких груп суха виробництва РАТ “Биопрепарат”
(Санкт-Петербургський НДІ вакцин і сироваток та підприємство з виробництва
бактерійних препаратів МОЗ РФ). Бактеріофаг сальмонельозний індикаторний рідкий
(О-фаг) та бактеріофаг сальмонельозний лікувальний груп А, В, С, Д, E сухий
виробництва НВО “Бактериофаг” Підприємства з виробництва бактерійних препаратів
(м. Тбілісі, Грузія). Суха цитратна кроляча плазма державного підприємства
“Аллергон” (м. Ставрополь, РФ). Для здійснення молекулярно-генетичних
досліджень використовували матеріали і реактиви таких виробників: агароза для
електрофорезу тип А фірм “Pharmacia” (Австрія), “LaСhema” (Чехія); альбумін
сироватки бика, дезоксихолат натрію, брідж-58 фірми “Sigma Chemical Co.” (США);
рибонуклеаза А, фенілметилсульфонілфторид, бромистий етидій фірми
“Serva-Feinbiochemia heldelberg” (США); додецилсірчаної кислоти натрієва сіль
(ДСН), тритон Х-100, лізоцим знесолений ліофілізований із білка яйця (марка А),
ендонуклеази рестрикції науково-виробничого Центру “ВІОРОL” (РФ).
2.2. Методи вивчення біологічних властивостей та внутрішньовидове
епідеміологічне фенотипування штамів S. aureus subsp. aureus
Вивчення морфологічних, тінкторіальних, культуральних і біохімічних
властивостей стафілококів проводили загальноприйнятими методами як викладено в
офіційних документах [42, 62, 66]. Оцінювали: фенотипічні характеристики
макроколоній, які утворювали ці мікроорганіз
- Київ+380960830922