РАЗДЕЛ 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследования проводили в лаборатории кафедры фармакологии ЛугГМУ,
сертифицированной Государственным фармакологическим центром МЗ Украины
(свидетельство № 41 от 30 мая 2002 г. и № 07 от 29 сентября 2005 г.) в полном
соответствии с требованиями Комиссии по биоэтике ЛугГМУ (протокол № 6 от «25»
сентября 2006 г.).
Опыты выполнены на 431 белой беспородной крысе, а также крысах линии Вистар,
массой 170-250 г. Все животные были половозрелые, обоего пола. В опыт брались
крысы с интактным пародонтом, что устанавливалось путем визуального осмотра
полости рта. Интактные животные находились в условиях вивария ЛугГМУ и получали
стандартную диету в виде гранулированного корма по установленным нормам. Доступ
к воде был свободным.
Используемые в работе методические принципы и приемы выполнены в соответствии с
существующими рекомендациями и указаниями Государственного фармакологического
центра Министерства здравоохранения Украины [205-209], а также согласно
инструктивно-методических материалов, разработанных учеными стран ЕЭС
[210-212].
Эвтаназию животных осуществляли передозированием эфирного наркоза согласно
требованиям Комиссии по биоэтике ЛугГМУ.
ХГП воспроизводили с помощью 3-х моделей: модели сниженной жевательной функции,
кальций-дефицитной модели со сниженной жевательной функцией и перекисной
кальций-дефицитной модели со сниженной жевательной функцией [206].
Модель сниженной жевательной функции (модель І) воспроизводили на протяжении
4-х недель путем содержания крыс на специальном пастообразном рационе питания,
норма потребления которого – 60-65 г и 10 мл молока в сутки на 1 крысу массой
160-220 г. Пастообразная смесь продуктов питания готовилась следующим образом:
небольшие порции стандартного набора продуктов, представленных в табл. 2.1, на
3 дня эксперимента измельчали мясорубкой дважды, смешивали с положенным по
массе крысы количеством молока и хранили в холодильнике при температуре +4°С.
Крысы получали рацион ежедневно, в поилках была питьевая вода.
Таблица 2.1
Состав пастообразного рациона питания по [206]
Наименование продукта
Состав (%)
Количество (г) на 10 крыс
Овес (пшеница)
31,5
201,6
Хлеб
6,3
40,3
Крупа
4,7
30,1
Мясо (рыба)
9,7
62,1
Молоко
15,7
100,5
Овощи (морковь, свекла)
15,8
101,1
Зеленый корм
15,0
100,5
Хлорид натрия
0,3
1,9
Дрожжи
0,3
1,9
Кальций-дефицитную модель со сниженной жевательной функцией (модель ІІ)
воспроизводили в течение 4 недель путем содержания крыс на описанном выше
пастообразном рационе. Однако вместо питьевой воды в поилках содержался 2%
раствор ЭДТА (этилендиаминтетраацетат) [213].
Перекисную кальций-дефицитную модель со сниженной жевательной функцией (модель
ІІІ) воспроизводили в течение 8 недель путем содержания крыс на описанном выше
пастообразном рационе. Вместо питьевой воды в поилках содержался 2% раствор
ЭДТА. Ежедневно в утренние часы крысам перорально (через металлический зонд)
вводили прооксидант делагил (хлорохина фосфат) (производство «ICN Угорщина АТ»,
Венгрия) в дозе 30 мг/кг в виде 0,59% водного раствора.
Забой животных проводили через 2 и 4 недели (модели І и ІІ), а модель ІІІ –
через 2, 4, 6 и 8 недель с начала моделирования ХГП.
Потенциальный пародонтопротектор и препарат сравнения применяли ежедневно на
протяжении всего срока моделирования заболевания 1 раз в сутки. Липоевую
кислоту (производство Одесского ГП «Биостимулятор») вводили перорально (через
металлический зонд) в дозе 100 мг/кг в виде 0,5% водного раствора. В качестве
референтного препарата использовали лецитин (производство Фармасайнс Инк.,
Монреаль, Канада), который животные получали перорально (на измельченном хлебе)
в дозе 1 г/кг, как это указано в работе [195].
Клиническую оценку течения ХГП проводили 1 раз в неделю путем тщательного
визуального осмотра в соответствии с рекомендациями [206]. Состояние тканей
пародонта оценивали в баллах у каждой крысы по оригинальной специально
разработанной нами шкале:
1. Зубные отложения:
0 – отсутствуют,
1 – мягкие,
2 – твердые.
2. Гиперемия и отёчность десен:
0 – отсутствуют,
1 – межзубных сосочков и маргинальной десны,
2 – альвеолярной десны.
3. Кровоточивость десен:
0 – отсутствует,
1 – от раздражителей,
2 – самопроизвольная.
Количественную оценку степени деструктивного процесса в пародонте осуществляли
после забоя животных. Для этого методом цифровой рентгенографии с помощью
радиовизиографа (производство фирмы Dexis, США) делали радиовизиографические
снимки скелетированных верхней и нижней челюстей (после механического удаления
мягких тканей) и с помощью специально разработанной в лаборатории кафедры
фармакологии ЛугГМУ компьютерной программы на базе Intel Pentium-II-450 MHz
производили определение линейных размеров обнажения корней моляров.
Относительное обнажение корней моляров определяли по величине К (в процентах)
по формуле:
где Дl – расстояние от края зубной альвеолы до нижнего края коронковой
части зуба (пиксели),
l – расстояние от края зубной альвеолы до верхнего края коронки зуба
(пиксели).
Величина К определялась для каждого корня всех моляров одной верхней и нижней
челюстей исследуемых групп крыс и образовывала для каждой группы вариационный
ряд [206].
Состояние процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) у животных с ХГП
оценивали по содержанию в сыворотке крови первичных продуктов – диеновых
конъюгатов (ДК), в крови и ткани десен – конечных продуктов липидпереокисления,
реагирующих с
2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК-реактанты).
Принцип количественного определения ДК основан на способности молекул
полиненасыщенных жирных кисло
- Київ+380960830922