РАЗДЕЛ 2
Материалы и методы исследований
Объекты исследований
Объектом исследований в большинстве экспериментов, связанных с облучением
животных, служили кольцевые сегменты грудной аорты и сонной артерии самцов
кроликов породы "Шиншилла" весом 2,5-3 кг, содержавшихся на стандартном рационе
в виварии института фармакологии и токсикологии АМН Украины. В опытах,
связанных с гиперхолестеринемией и облучением использовались аналогичные
животные, содержавшиеся в виварии института кардиологии им. Н.Д. Стражеско АМН
Украины. За 30 мин до начала острого эксперимента в ушную артерию животных
вводился гепарин в дозе 50 ед/кг массы животного для предотвращения
тромбообразования в препарируемых сосудах и повреждения сосудистого эндотелия.
Исследуемые сосуды изолировались и помещались в препаровальную чашку со
стандартным раствором Кребса при комнатной температуре. Сосуды тщательно
очищались от соединительной ткани и разрезались на кольцевые сегменты шириной
2-3 мм. Препараты сосудов кроликов оставались функционально полноценными в
течение двух, иногда трех суток при хранении их в холодильнике при температуре
+4оС. Критерием жизнеспособности сосудистых препаратов являлось наличие реакций
сокращения на фенилэфрин и гиперкалиевый раствор, а также реакции расслабления
на ацетилхолин, не измененные по сравнению с первым днем проведения
экспериментов.
Кроме того, были проведены эксперименты на кольцевых сегментах грудной аорты
контрольных и спонтанно гипертензивных крыс обоего пола линии Wistar массой
180-240 г, которые содержались на стандартном рационе в виварии института
фармакологии и токсикологии АМН Украины. Препаровка сосудов крыс осуществлялась
также, как и сосудов кроликов. Ширина кольцевых сосудистых сегментов составляла
1-1,5 мм. Препараты грудной аорты крысы сохраняли жизнеспособность при хранении
их в холодильнике при температуре +4оС в течении двух суток.
В экспериментах с гипоксическими растворами объектом исследований служили
кольцевые сегменты верхней части огибающей и нисходящей эпикардиальных
коронарных артерий, выделенных из сердца взрослых свиней обоего пола массой
200-300 кг. Ширина сосудистых сегментов составляла 2-3 мм. Сердца были получены
на Дарницком мясокомбинате во время плановых забоев свиней. Животных умерщвляли
при помощи электрического удара, а через 15-20 минут выделялось сердце. После
этого участки сердца с коронарными артериями помещались в термос при
температуре около 0оС со стандартным раствором Кребса, в котором
транспортировались к месту проведения эксперимента. Препаровка и начало
эксперимента осуществлялись спустя 1.5-2 часа после забоя животного. Препараты
коронарных артерий свиньи оставались функционально полноценными в течение трех
или четырех суток при хранении их в холодильнике при температуре +4оС.
Условия облучения животных
Экспериментальные животные подвергались общему, однократному внешнему
g-облучению с использованием источников 137Cs "Игур" (Институт онкологии и
радиологии АМН Украины) и 60Co "ТГТ Рокус-М" Россия (Киевская областная
клиническая больница). Для ограничения степени свободы при облучении, животные
помещались в специально сконструированный бокс из органического стекла, при
этом поток излучения фокусировался на центр тела. Мощность дозы при облучении
кроликов от источника "Игур" (137Cs) составляла 0,307 Гр/мин, а при облучении
источником "Рокус" (60Co) она находилась в пределах 0,80-0,845 Гр/мин для
кроликов и 0,833-1,0 Гр/мин для крыс в зависимости от состояния источника на
момент облучения. Оба источника находились под постоянным плановым
дозиметрическим контролем.
Животные облучались в дозах 1, 2 и 4 Гр при использовании источника 137Cs и 2,
4 и 6 Гр при использовании 60Co. Острый эксперимент проводился на 7-9 и 30-35
дни после облучения. Выбор максимальной дозы облучения был обусловлен
следующими причинами: а) ее величина значительно меньше величины ЛД50/30 (для
кроликов 10-12 Гр, для крыс 9-10 Гр) [364], поэтому не наблюдалось гибели
животных в течение всего времени эксперимента; б) эта доза меньше пороговой
дозы (8,3-8,8 Гр), при превышении которой начинают обнаруживаться различимые
морфологические изменения в эндотелиальных клетках [27]; в) при этих дозах
хорошо выражены радиационные эффекты изменений сосудистой реактивности.
Поскольку значительная часть данной работы посвящена изучению эндотелиальных
эффектов, длительность пострадиационного периода была выбрана на основе данных
о времени наибольшего проявления радиационного влияния на эндотелий.
Установлено, что на 7-9 день после облучения регистрируется максимальное
количество поврежденных клеточных элементов эндотелиоцитов, а также наибольшая
степень изменения транспортных функций эндотелия, тогда как на 30-й день эти
нарушения исчезают [27], поэтому именно эти сроки были выбраны для проведение
экспериментов.
Методы исследования сократительной активности сосудистых гладких мышц
Для проведения экспериментальных исследований была создана установка для
изучения сократительной активности сосудистых гладких мышц (рис. 2.1).
Установка содержит три параллельных канала с механоэлектрическими
преобразователями и позволяет одновременно регистрировать сократительные
параметры трех мышечных препаратов. Предусмотрена двухступенчатая электронная
система стабилизации температуры рабочей камеры. Температура регистрируется при
помощи термодатчиков МТ-54, показания которых определяют режим работы
термоэлементов, которые осуществляют грубую (первая ступень, 25-32оС) и точную
(вторая ступень)
Рис. 2.1. Блок-схема установки для
- Київ+380960830922