ОГЛАВЛЕНИЕ
Стр
I ВВЕДЕНИЕ............................................. 3
II ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ..................................... 8
1. Бактериальная контаминация - основной показатель безопасности продовольственного сырья и пищевых
продуктов.............................................. 8
2. Биологические характеристики L. monocytogenes.............. 10
3. Экология листерий....................................... 15
4. Эпизоотология и эпидемиология листерий..................... 18
5. Листерии в продовольственном сырье и пищевых продуктах... 21
6. Методы индикации и идентификации листерий............... 33
III СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВAI 1ИЯ................................. 42
1. Материалы и методы исследований............................ 42
2. Результаты исследований.................................... 55
2.1 Культурально-морфологические и биохимические свойства
популяции листерий на различных питательных средах..... 55
2.2 Изучение биологических особенностей листерий в популяции
при различных температурных режимах культивирования 63
2.3 Изучение культурально-морфологических и биохимических
свойств листерий, подвергнутых влиянию низких и отрицательных температур.................................. 66
2.4 Разработка метода индикации L.monocytogenes в продовольственном сырье и продуктах питания на основе
ИФА.................................................... 75
IV ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ..................................... 82
V ВЫВОДЫ................................................................................... 91
VI СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ........................ 93
VII ПРИЛОЖЕНИЕ................................................ 114
Листериоз является природно-очаговым опасным инфекционным заболеванием человека и животных и представляет актуальную медико-ветеринарную проблему.
Болезнь характеризуется множественностью источников возбудителя инфекции, многообразием факторов и путей его передачи, а также разнообразной клинической картиной (часто протекает в виде нейроинфекции).
Начиная с 80-х годов прошлого века, листериоз привлекает к себе внимание в связи с регистрацией заболеваний людей, связанных с употреблением продуктов питания, контаминированных возбудителем листериоза. Так в США, Канаде, Мексике, Великобритании, Швейцарии, Франции и других странах были зарегистрированы крупные вспышки листериоза людей с высоким уровнем смертности при употреблении пищевых продуктов животного и растительного происхождения: молока, мягких сыров, мяса и мясных продуктов, квашеной капусты и др. [3, 69, 118, 119, 121, 131, 143, 147, 148, 157, 166, 172, 174]. К настоящему времени листериоз животных зарегистрирован в более чем 50 странах мира, где он наносит весьма существенный экономический и эпидемиологический ущерб.
Эпизоотическая ситуация по листериозу в нашей стране остается напряженной. Листериоз животных учитывается, начиная с 1956 года. Регистрация и учет листериоза у людей, как самостоятельной нозологической формы, введена Минздравом Российской Федерации в 1992г. [60].
Согласно данным Управления Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по городу Москве за первое полугодие 2007 г. зарегистрировано 9 случаев заболевания лисгериозом, в том числе: среди беременных женщин с отягощенным акушерским и гинекологическим анамнезом зарегистрировано 3 случая листериоза, клинический листериоз (окулогландулярная форма)
л истерии часто грам вариабельны. В мазке располагаются поодиночке, парами, в виде цепочек по 3, 5 и более клеток, возможно в виде частокола или же римской буквы V, также можно увидеть и групповое расположение, параллельное вдоль длинной оси. В мазках из инфицированного патологического материала или из жидкой среды встречаются клетки кокковой формы диаметром 0,4-0,5 мкм и длиной 0,4-0,6 мкм. Они могут быть ошибочно приняты за стрептококки. В более зрелых культурах могут встречаться формы в виде волокон длиной до 6-20 мкм. Капсул и спор не образуют [6, 36, 70, 94].
Электронномикроскопическими исследованиями установлено, что клетки возбудителя листериоза в основном имеют типичную палочковидную форму. Установлен полиморфизм листерий, находящихся в одной фазе роста. Молодые клетки значительно крупнее, чем клетки на более поздних фазах роста, когда преобладают особи меньших размеров - овоиды и кокковидные формы. Особенно выражен полиморфизм клеток у культур листерий, культивируемых при температуре 37°С.
На ультратонких срезах, полученных с помощью электронной микроскопии, листерии имеют типичную для грамположительных бактерий ультраструктуру. Клетки ограничены толстой равномерной клеточной оболочкой 25-30 нм, далее идет цитоплазматическая мембрана и нуклеоид. В отличие от других грамположительных бактерий у листерий имеется большое количество мезосом - аналогов митохондрий - носителей дыхательных ферментов. Мезосомы листерий могут иметь вид простых инвагинаций, сложных трубчатых и везикулярных структур. Установлено изменение строения мезосом в зависимости от фаз роста культуры. У клеток вирулентных штаммов листерий количество мезосом с понижением температуры инкубирования посевов уменьшается, у клеток слабовирулентных штаммов листерий выявляется обратная зависимость [55].
Электронно-микроскопическими исследованиями установлены различия в развитии жгутикового аппарата листерий в зависимости от
12
температуры инкубирования посевов.
При температуре 22°С листерии имеют от одного до восьми жгутиков различной формы и длины:
1) длинные волнистые, превышающие длину клетки в 3-8 раз;
2) длинные совершенно прямые, превышающие длину клетки в 2-12 раз. Расположение жгутиков перитрихиальнос, встречаются мульти- и лофотрихи.
При температуре 37 °С жгутиковый аппарат не развивается, единичные клетки имеют 1-2 коротких извитых или прямых жгутика
Следует отметить различия по форме жгутиков у вирулентных и слабовирулентных штаммов листерий. У вирулентных штаммов клетки имеют волнистые жгутики, у слабовирулентных штаммов-преимущественно длинные, прямые [56]..
Листерии являются факультативными аэробами и микроаэрофилами. Оптимальная температура роста 25-37 °С, однако температурный спектр развития широк и находится в пределах от 1 до 45 °С [4, 35, 70, 94]. Листерии, подобно иерсиниям, способны не только хорошо сохраняться, но и размножатся при низких температурах [37, 100, 103]. В связи с этим в овощехранилищах и хладокомбинатах, где поддерживаются низкие температуры, имеются благоприятные условия для существования и размножения листерий. Отмечается уникальная способность возбудителя листериоза репродуцироваться при транспортировании контаминированных продуктов даже при строгом соблюдении "холодовой цепи" [13, 37, 158].
Листерии достаточно устойчивы к воздействию неблагоприятных факторов внешней среды: могут расти при низких и высоких значениях pH от
5,0 до 9,6 (оптимум рН=7,0-7,4), высокой концентрации поваренной соли (10%) [47, 198].
В аэробных условиях на мясопептонном агаре 24-48-часовые культуры листерий образуют круглые, полупрозрачные колонии в виде капель росы диаметром 0,5-1,5 мм,. При обычном освещении колонии обладают
I
- Киев+380960830922