<p>РАЗДЕЛ 2.<br />МАТЕРИАЛЫ И ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ<br />Экспериментальная работа выполнена в опытном хозяйстве «Украинка» Института<br />животноводства УААН на протяжении 1986-1998 годов в соответствии с общей схемой<br />(рис. 2.1). <br />Рис. 2.1 Схема исследований<br />Проявления гетерозиса изучались с помощью сравнения показателей развития<br />чистопородных и межпородных помесных животных – доноров эмбрионов, реципиентов<br />при трансплантации эмбрионов, а также при взаимодействии этих генотипов в<br />период внутриутробного развития. <br />В исследованиях использованы коровы-доноры эмбрионов черно-пестрой (ЧП),<br />красной степной (КС), айрширской (А), симментальской (С) и лебединской пород<br />(Л), а также их помеси с голштинской (Г), швицкой (Ш), монбельярдской (М) и<br />красной датской (КД) породами. <br />От коров-доноров за 415 изъятий было получено 5150 эмбрионов, использовано для<br />пересадки 1270 штук зародышей, проведено 893 эмбриопересадки, в их числе в 377<br />пересадках пересаживали по два эмбриона в коллатеральные рога матки<br />реципиентов, использовано 893 телки-реципиента возрастом до 18 месяцев и живой<br />массой 350-400 кг, получено 655 телят-трансплантатов. Особенности<br />индивидуального роста телят-трансплантатов от рождения и до 18 месячного<br />возраста изучались на 390 потомках. <br />При проведении работ, связанных с трансплантацией эмбрионов, руководствовались<br />«Инструкцией по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота» [44], а также<br />новыми данными, полученными в результате совершенствования данной технологии<br />[10, 43, 44, 139]. <br />В качестве коров-доноров ранних эмбрионов использовали высокопродуктивных<br />животных, выбракованных из основного стада и переведенных в донорское стадо<br />коров. При отборе коров-доноров учитывали не только генотип отобранных коров,<br />но и показатели молочной продуктивности, учитывали тип животных по комплексу<br />селекционных признаков. Выбраковка коров с высокой молочной продуктивностью в<br />племенных хозяйствах проводится в основном по причинам патологии<br />воспроизводительных органов и при нарушении полового цикла. Поэтому животные<br />подвергались предварительному лечению с целью возможности дальнейшего их<br />использования как доноров ранних эмбрионов. <br />Использовали телок-реципиентов с нормальной физиологией половой системы без<br />патологии родовых путей. Использовались телки от матерей, показавших невысокую<br />молочную продуктивность. Возраст подопытных животных составлял 15-18 месяцев<br />при живой массе не менее 350 кг на момент пересадки эмбрионов. <br />Обеспечивалось полноценное сбалансированное кормление коров-доноров эмбрионов и<br />телок-реципиентов, в соответствии с разработанными в хозяйстве рационами.<br />Содержание привязное для коров-доноров с ежедневным двухчасовым моционом.<br />Телки-реципиенты в зимний период содержались на привязи, а в летний период<br />использовалось беспривязное содержание животных в загонах с оборудованием<br />навесов над кормушками. <br />Множественную овуляцию у коров-доноров вызывали путем инъекций<br />фолликулостимулирующего гормона (ФСГ-Р американского производства фирмы<br />Schering) в общей дозе 33 мг (8 инъекций с соблюдением интервала между<br />инъекциями 12 часов) [44, 139]. Гормональную обработку сочетали с двукратными<br />инъекциями простагландина Чехословацкого производства «эстрофан» в дозе по 2 мл<br />на инъекцию, одновременно с 5 и 6 инъекцией ФСГ-Р. Данный препарат является<br />лучшим из серии простагландинов [35, 128] обеспечивает максимально полную<br />овуляцию всех созревших фолликулов и минимальный интервал между всеми<br />овуляциями, что обеспечивает в дальнейшем высокую эффективность искусственного<br />осеменения коров-доноров. Этот же препарат использовали и для синхронизации<br />половой охоты у телок-реципиентов. <br />Инъекции проводились на 8 – 12 день полового цикла у коров-доноров, с<br />обязательным ректальным контролем наличия в одном из яичников животного хорошо<br />развитого желтого тела и отсутствием созревшего фолликула [44, 139, 208]. <br />На 5 день после начала гормональной обработки применяли трехкратное осеменение<br />коров-доноров свежеразмороженной спермой (по две спермодозы на одно<br />осеменение). Осеменение проводили ректо-цервикальным способом, наиболее<br />эффективным по уровню оплодотворяемости яйцеклеток [12, 60], с введением спермы<br />в район бифуркации матки животного с применением одноразовых полихлорвиниловых<br />пипеток и одноразовых защитных чехлов [43, 44]. <br />Извлечение зародышей проводили в специально изготовленных станках для надежной<br />фиксации животного с дополнительно оборудованной стерильной комнатой<br />(лабораторией) для работы с эмбрионами. <br />Эмбрионы извлекали на 7 день после начала первого осеменения коров-доноров.<br />Наружные половые органы животного тщательно мыли и дезинфицировали, проводили<br />низкую сакральную анестезию 2% раствором новокаина (5,0-10,0 мл), строптивым<br />животным вводили миорелаксант ромпун или рометар. <br />Двухканальный катетер вводили в один из рогов матки животного, фиксировали его<br />в верхней трети рога матки под обязательным ректоцервикальным контролем. В<br />качестве промывной жидкости на каждый рог матки животного использовали 500,0 мл<br />среды Дюльбекко с добавлением в нее 2% фетальной сыворотки теленка [44, 139]. <br />После отстаивания флаконов с промывной жидкостью для осаждения эмбрионов (20-30<br />мин), с помощью сифона удаляли надосадочную жидкость, а отстой переносили в<br />чашку Петри и исследовали под бинокулярной лупой. Обнаруженные эмбрионы<br />переносили в чашки Петри меньшего диаметра со стерильной питательной средой.<br />Качество эмбрионов оценивали под 100 кратном увеличении в проходящем свете.<br />Эмбрионы дифференцировали на полноценные, дегенерированные и неоплодотворенные<br />яйцеклетки, общее количество которых учитывалось в</p>
- Киев+380960830922