1
ОГЛАВЛЕНИЕ
+ Введение.............................................................................6
1. Обзор литературы...................................................................... 12
1.1. Бруцеллез как зоонозное заболевание и его
распространение.....................................................................12
1.2. Биологические свойства и современная таксономия
рода Brucella ......................................................................20
1.3. Строение клетки бруцелл и ее антигенная структура...................................29
1.4. Сравнительное изучение белковых систем и состава жирных
кислот в аспекте идентификации и дифференциации бактерий 42
1.4.1. Белковые системы бактерий...................................42
1.4.1.1. Значимость различных белковых систем в сравнительном изучении бактерий.............................................. 42
1.4.1.2.Белковые системы в сравнительной характеристике бруцелл.. 52
1.4.2. Изучение спектров жирных кислот в целях идентификации
и дифференциации бактерий...............................................54
1.4.2.1. Применение газо-жидкостной хроматографии для
Ф идентификации различных групп бактерий......................................54
1.4.2.2. Газо-хроматографический анализ жирных кислот применительно к бруцеллам.......................................58
1.5. Некоторые аспекты иммуногенеза при бруцеллезе и проблемы диагностики.........................................................61
1.5.1. Основные элементы иммунитета.................................................61
1.5.2. Стадии инфекционного бруцеллезного процесса и его иммунологические проявления.........................................................63
* 1.5.3. Диагностика бруцеллеза........................................................69
1.5.3.1. Клиническая и эпизоотологическая диагностика...............................69
1.5.3.2. Серологическая диагностика.................................................70
1.5.3.3. Применение иммуноферментного анализа (ИФА)
в диагностике бруцеллеза....................................................73
1.5.3.4. Аллергическая диагностика. Значение методов in vitro 81
1.6. Особенности патогенеза при бруцеллезе. Факторы
патогенности бруцелл..............................................85
1.7. Разработка средств вакцинопрофилактики бруцеллеза................94
1.7.1. Живые вакцины............................................96
1.7.2. Инактивированные корпускулярные вакцины................97
1.7.3. Молекулярные вакцины.....................................99
1.7.4. Искусственные вакцины...................................103
1.8. Основные биотехнологические подходы к получению субклеточных фракций бруцелл различной функциональной направленности...................................................105
1.9. Основные направления национальных и региональных
программ по контролю за бруцеллезом.......................... 125
2. Собственные исследования........................................ 129
2.1. Материалы и методы исследований.................................129
2.1.1. Эпизоотологические исследования.........................129
2.1.2. Характеристика изучаемых культур бактерий и условия их выращивания....................................................130
2.1.3. Методы фракционирования бактерий........................133
2.1.4. Аналитические методы....................................142
2.1.5. Методы диагностических исследований.....................148
2.1.6. Методы изучения иммуногенной активности препаратов 150
2.1.7. Расчеты экономической эффективности от внедрения
лротивобруцеллезных мероприятий...........................152
2.1.8. Методы статистической обработки.........................152
2.2. Результаты собственных исследований........................155
2.2.1. Субклеточные структуры бактерий в приложении к решению вопросов
таксономии, идентификации и дифференциации —155
2.2.1.1. Сравнительный анализ белковых спектров бактерий 155
2.2.1.1.1. Изучение растворимых белков микобактерий........155
2.2.1.1.2. Белковые системы стафилококков..................165
2.2.1.1.2.1. Сопоставление спектров мембранных белков
стафилококков........?........................166
ко отстоящих видов (382).
В. А. Бадин (15), изучая гомологию ДНК и спектры рибосомальных белков коагулазоотрицательным стафилококков, показал, что данные ДНК-ДНК-гибридизации в целом коррелируют с результатами сравнительного анализа рибосомальных белков.
В работах Г. К. Дегтевой с соавторами (81, 82) установлено, что сходство спектров рибосомальных белков стафилококков можно расценивать на уровне рода.
Эти исследования были продолжены на модели псевдомонад (60) и показано, что при сопоставлении белковых профилей рибосом псевдомонад проявляется высокая степень гомологии, указывающая на родовой уровень дифференциации бактерий.
Мембранные белки
Особый интерес представляют данные по анализу спектров мембранных белков в таксономическом аспекте, поскольку мембраны, как и рибосомы, --эволюционно консервативные структуры бактериальной клетки, и в том же время заключают в себе почти все функции, общие и специфические, присущие бактериальной клетке в целом (272).
Видовая специфичность характеристик спектров мембранных белков установлена для.микоплазм (296). Авторами установлено, что наряду с общевидовыми признаками в протеинограмме, каждый штамм Mycoplasma, Acholeplasma и Ureaplasma обладал уникальным белковым спектром.
По данным ряда авторов (413, 517) электрофореграммы мембранных
белков позволяют идентифицировать бактериальные L-формы. Показаны отчетливые межродовые отличия среди L-форм Proteus, Streptobacillus,
Staphylococcus, Streptococcus. Быстрая идентификация L-форм при этом возможна при сопоставлении с протеинограммами эталонных штаммов.
Электрофореграммы, полученные при изоэлектрическом фокусировании мембранных белков кариогенных и родственных им оральных стрептококков позволили S.Hamada, J. Mizuno (391) провести группирование штаммов внутри видов, которое коррелировало с дифференцированием по антигенным свойствам и данными геносистематики.
Изучение состава мембранных белков помогло И. В. Тарасевич и Е. А.
Плориной (253) определить некоторые взаимосвязи в окончательно не сформированной трибе Rickettsieae. Авторами на основе сопоставления белковых спектров были идентифицированы до вида вновь выделенные штаммы группы клещевой пятнистой лихорадки.
В литературе имеется довольно обширный материал о сравнительном изучении белкового состава наружной и цитоплазматической мембран грамот-рицательных бактерий. Известно, что в состав наружной мембраны грамотри-цательных бактерий входят группы основных белков, очень близких по электрофоретическим свойствам и составляющим около 70% всех белков наружной мембраны (513).
С помощью двумерного электрофореза было выявлено более 120 полипептидов во фракции цитоплазматических мембран и около 50 полипептидов во фракции наружной мембраны E. coli (490). Отмечено, что состав мембранных белков E. coli является стабильным признаком, независящим от фазы роста бактерий, но подвержен некоторым изменениям в зависимости от состава питательном среды (432).
C. A. Schneitman (493) провел сопоставление спектров белков
наружной мембраны нескольких штаммов E.coli, Shigella и Salmonella, используя различные электрофоретические методы. В результате штаммы были разделены на две группы в зависимости от присутствия в спектре главных белков пептида-2. При этом все штаммы Shigella показали сходство с E. coli К12, а белковый спектр Salmonella был подобен E. coli 0-111.
Интересное исследование провел R. Parton (463), сравнив мембранные белки одного гладкого (S) и семи шероховатых (R) штаммов Salmonella minnesota. Все штаммы показали в целом одинаковый профиль белкового спектра при небольших различиях между S- и R-вариантами, в частности происходит понижение количественного содержания фракции с М.м 40000 и 37000 Д.
S. Ichihara и T.Mizushima (410) при использовании трех различных систем электрофореза установили разницу в белковом составе наружной мембраны E. coli К-12, E. coli В и E. coli J-5. Основные отличительные признаки касались белков, связанных с пептидогликаном.
Изучен состав клеточных оболочек Neisseria sicca (487),содержащих около 20 белков с М.М от 15000 до 100000 Д. Почти все эти белки локализованы в наружной мембране. Белковые спектры 8 непатогенных видов рода Neisseria
- Київ+380960830922