Тестирование вирулентности синегнойной палочки, изолированной от песцов

2
Содержание
Стр.
1. ВВЕДЕНИЕ................................................... 3
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ........................................... 5
2.1. Распространение и патогенетическая роль синегнойной
палочки.................................................. 5
2.2. Биологические свойства синегнойной палочки
(Pseudomonas aeruginosa)................................. 8
2.3. Инвазивные свойст ва синегнойной палочки................ 9
2.4. Экзотоксины синегнойной палочки........................ 13
2.5. Твотирование патогенности синегнойной палочки........... 16
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.................................. 20
3.1. Материал и методы исследования.......................... 20
3.2. Результаты экспериментального исследования.............. 27
3.2.1. Результаты серологического типирования изолятов от
павших песцов.......................................... 27
3.2.2. Результаты биотестирования культур синегнойной палочки . . 30
3.2.3. Тестирование экзотоксина А............................ 33
3.2.4. Результаты определения протеолитической активности синегнойной палочки, изолированной от песцов............ 40
3.2.5. Тестирование адгезивной способности................... 46
3.2.6. Статистическая связь между показателями вирулентности синегнойной палочки..................................... 52
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ....................... 55
5. ВЫВОДЫ.................................................... 63
6. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.......................... 64
7. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПО РЕАЛИЗАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ............................................... 78
7.1. Рекомендации по выделению и идентификации
культур синегнойной палочки.............................. 78
7.2. Биотестирование синегнойной палочки, изолированной
от песцов................................................ 78
7.3. Коллекция штаммов продуцентов экзопродуктов для приготовления вакцины против синегнойной
инфекции песцов.......................................... 96
3
1. ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы. В производстве пушнины песцеводству [фидается важное значение прежде всего из-за сравнительно низкой себестоимости и высокой окупаемости шкурковой продукции. Однако сдерживающим фактором в его развитии является патология, ассоциированная с синегнойной палочкой. Она, по данным О.Б. Литвинова (2000), контаминирует воду, корма, предметы ухода за животными и, проникая в организм песцов, обусловливает бактерионосительство, заболеваемость и гибель животных. Из-за поражения гениталий нарушается эмбриогенез, происходят аборгы и рождается ослабленный молодняк. В результате снижается воспроизводительная функция животных и в зверохозяйствах формируется стационарное неблагополучие.
Вакцины, используемые в норководсгве, обладают слабой протектив-ной активностью при псевдомонозе у песцов, поскольку серологический профиль возбудителя болезни не совпадает с природными маркерами патогенности микроба и защитной активности их дня пушных зверей.
Относительно диагностической ценности поверхностных структур синегнойной палочки, таких как адгезивные антигены, внеклеточная слизь, степени продуцирования ими экзотоксина А и протеолитических ферментов научная информации неоднозначна. Зависимость вирулентности синегнойной палочки от степени выраженности синтеза, обусловливающего ее экзопродукты, определить еще предстоит. Тем более, что адаптированные к задачам ветеринарных лабораторий, медицинские методы лабораторного анализа не учитывают оценки корреляции многопланового тестирования с реакцией защиты организма. Еще не установлены ведущие факторы патогенности микроба, не оценена патогенетическая роль их для организма песцов. Между тем, такая информация необходима в познавательном и прикладном плане, в
9
ских соединений, не усваиваемых другими бактериями. Сахара, например, разлагаются ими через образование 2- кето-3-дезокси-6- фосфогшоконовой кислоты (КДФГ - путь). Способны к росту также за счет восстановления нитратов. Благодаря нетребовательности к источникам питания псевдомонады распространены повсеместно: в почве, воде, сточных водах и в воздухе (Шлегель, 1972).
ДНК псевдомонад содержит Г + Цв пределах 58 - 70 мол %. Во многих естественных местах обитания эти бактерии являются основными агентами, ответственными за аэробную минерализацию органического материала. Они практически единственные хемогетеротрофы, способные в аэробных условиях фиксировать молекулярный азот (Стейнер, Эдельберг, Ингрэм, 1979). Поэтому' псевдомонады можно получить в виде накопительных и чистых культур, используя их способность расти на среде с нитратом как источником азота, а также с солями различных органических кислот в качестве источника углерода и энергии (Герхерд и др., 1983).
2.3. Инвазивные свойства синегнойной палочки
Наиболее четкое группирование свойств, определяющих патогенность (вирулентность) болезнетворных микроорганизмов представили Mac Loc (1948), Watson, Brandly (1949). Эти свойства они объединили в три атрибута патогенноза: инфективность, инвазивность и токсигеиность.
Инфективность^или заразительность - способность вызывать инфекционный процесс в естественных условиях, обусловленная способностью микроорганизма при передаче от одного хозяина к другому выживать в окружающей среде и способностью проникать через естественные барьеры.
Инвазивность - способность преодолевать защитные приспособления микроорганизма и размножаться в нем. Она обусловлена поверхностными структурами, защищающими микробную клетку от фагоцитоза (капсулы, по-
* А 10/.
верхностные антигены), а так же особенностями метаболизма бактерий, помогающими им выживать в условиях меняющейся среды.
И, наконец, токсигенность, или токсичность - способность микроорганизма (любым путем) вмешиваться в метаболические функции хозяина, нарушая постоянство его внутренней среды.
Все эти три атрибута патогенных бактерий могут изменяться независимо друг от друга и являются относительно самостоятельными. Каждая из физиологических детерминант вирулентности выявляется в процессе изучения вирулентных и вируавирулентных культур одного и того же вида микроорганизма.
Нели экзопродукты, обладающие свойствами преодолевать защитные приспособления хозяина, размножаться в нем и вмешиваться в метаболические функции микроорганизма в представлении многих исследователей идентифи- цируются как самостоятельный фактор патогенности , то структурные компоненты клеточной мембраны патогенных бактерий требуют классифика- ции. Наиболее удачно она представлена Мс Ьебс! (1958). По его представлениям в клетках патогенных бактерий имеются:
1. Нетоксичные антигенные компоненты, подавляющие защитные реакции макроорганизма, обладающие нротективными свойствами.
2. Нетоксичные антигенные компоненты, подавляющие защитные реакции макроорганизма, антитела к которым не протективны.
3. Нетоксичные неантигенные компоненты, подавляющие защитные реакции макроорганизма.
4. Токсичные неантигенные компоненты клеточной поверхности, подавляющие защитные реакции макроорганизма.
Четвертую рубрику классификации ввела В.Г. Петровская (1967) для обозначения корд - фактора туберкулезного микроба. Однако, П.А. Емелья-ненко (1982 г.) скорректировал изменение, объясняя соединения миколовой