2
ОГЛАВЛЕНИЕ
Стр.
ВВЕДЕНИЕ 4
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8
1.1. Конструирование бактериальных препаратов (историческая справка) 8
1.2. Биологические свойства микроорганизмов, использующихся 11 для получения пробиотиков
1.2.1. Род В i fidobacterium 11
1.2.2. Род Lactobacillus 14
1.2.3. Род Enterococcus 15
1.2.4. Род Bacillus 16
1.3. Эпизоотологические основы применения пробиотиков в ветеринарии 19
2. СОБСТВЕ1ШЫЕ ИССЛЕДОВА1ШЯ 25
2.1. Материалы, методы и объем исследований 25
2.2. Результаты исследований 28
2.2.1. Подбор и апробация питательных сред для выделения чистых культур микроорганизмов и определения микробиологических показателей в Бифицине 28
2.2.2. Изучение таксономических свойств микроорганизмов 36
2.2.3. Биологические свойства микроорганизмов, выделенных
из кишечника телят 39
2.2.3.1. Бифидобактерии 39
2.2.3.2. Молочнокислые бактерии 47
2.2.3.3. Энтерококки 52
2.2.3.4. Аэробные бациллы 57
2.2.4. Характеристика типовых культур микроорганизмов, включенных в состав биопрепарата "Бифицин" 65
2.2.4.1. Bifidobacterium longum В-12 67
2.2.4.2. Lactobacillus plantarum P - 19
2.2.4.3. Enterococcus faecium E- 18
2.2.4.4. Bacillus subtilus В - 26
2.2.5. Биотехнология получения бактериального препарата "Бифицин"
2.2.5.1. Подготовка питательной среды с внесением ферментного комплекса
2.2.5.2. Асептические операции, культивирование бактерий, обработка биомассы
2.2.5.3. Технические условия и технологическая инструкция на производство биопрепарата "Бифицин"
2.2.6. Клинические и лабораторные испытания Бифицина при профилактике и лечении желудочно-кишечных болезней телят
2.2.6.1. Обоснование дозы препарата, препятствующей заболеваемости телят
2.2.6.2. Микробиологические показатели изменения энтероценоза в кишечнике телят
2.2.6.3. Показатели неспецифической резис тентност и телят в 10-дневном возрасте
2.2.7. Эффективность применения Бифицина при выращивании телят в производственных условиях
2.2.8. Экономическая эффективность мероприятий при применении Бифицина
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ 11РЕДЛОЖЕНИЯ
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ УКАЗАТЕЛЬ ИСПОЛЬЗОВАННОЙ
ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ
35
условно патогенных и патогенных микроорганизмов, в гам числе микроорганизмов родов Clostridium и Candida (32, 33).
1.2.3. Род Enterococcus
Известно, что из представителей рода Enterococcus для приготовления биопрепаратов используется вид E.faecium, который постоянно обнаруживается в кишечнике человека и животных, в почве, в воде, в пищевых продуктах, корме, подстилке, в воздухе, на предметах ухода. Первое описание морфологических и культуральных свойств энтерококков дал в 1899 г. Thiercelin (цит. но 54).
Установлено, что характерными свойствами E.faecium являются способность расти при температуре 50°С, выдерживать термическую обработку до 70 - 75°С (86). E.faecium - факультативные анаэробы, форма их клеток варьирует от сферических до овальных величиной менее 2 мкм в диаметре; располагаются они парами или цепочками; метаболизм их - бродильный, при этом преобладающим конечным продуктом при сбраживании глюкозы является молочная кислота; каталазу они не образуют, в присутствии кислорода в питательной среде с E.faecium может накапливаться перекись водорода; для развития и размножения данному микроорганизму нужны сложные питательные среды. E.faecium хорошо растут на стерилизованном обезжиренном молоке при температурном оптимуме 37°С, с содержанием аминокислот гуанина и цитозина в ДНК белка среды в пределах 33 - 42 мол.%. E.faecium растут на средах, содержащих 0,1% метиленовой сини, 6.5% - хлористого натрия, 40%-желчи при pH 9.6. Они термоустойчивы, не гидролизуют желатин, крахмал, но сбраживают эскулин, аргеиин, арабинозу. Не обладают патогенными свойствами (54. 63, 86).
Отмечено, что E.faecium обладает антимикробной активностью по отношению к возбудителям кишечных инфекций. Установлено, что энтерококки вида E.faecium являются обитателями кишечного тракта человека, сиинсй и крупного рогатого скота (54, 86). Энтерококки по многим культуральным, биохимическим, серологическим свойствам резко отличаются от стрептококков, а по количеству их в кишечнике человека и животных не уступают E.coli. Широкое их распространение во внешней среде свидетельствует о высокой устойчи-
16
в ости к неблагоприятным воздействиям. Энтерококки в 6o.ibuio.vi количестве обнаруживаются в сыром молоке, часто их выде.шот даже из пастеризованного молока. Протеолитическая активность E.faecium в 5 - 10 раз выше, чем у молочнокислых лактококков и стрептококков (104). E.faecium свертывают молоко, образуя ровный, плотный сгусток с титруемой кислотностью 80 - 100е Г.
E.faecium восстанавливают и свертывают лакмусовое молоко, развиваются при наличии в молоке 0,01% трифенилтетразолия хлорида. Они хорошо растут на обычных питательных средах. В бульоне создают равномерную муть без видимых хлопьев, а через 2-3 дня образуют осадок. Интенсивно они растут в средах с углеводами, особенно с добавлением к среде дрожжевого экстракта или автолизата.
1.2.4. Род Bacillus
Из представителей рода Bacillus для приготовления биопрепаратов используется вид Bacillus subtilis (87), которые широко распространены в природной окружающей среде и входят в состав аутофлоры .макроорганизмов.
Smith N.R. в 1952 г. изучил морфологические и культуральные свойства аэробных бацилл (195). Дойч Р. для идентификации аэробных бацилл использовал методы световой микроскопии (36). Установлено, что бактерии рода Bacillus представляют собой палочковидные, почти прямые подвижные клетки, образующие термоустойчивые споры эллиптической формы, не более одной в клетке. Они окрашиваются по Граму положительно. В. subtilis сбраживают глюкозу с образованием кислоты и ацетоина, при этом газ при ферментации не выделяется. Кислота образуется под воздействием В. subtilis также из арабинозы, ксилозы и маннита. В. subtilis образуют каталазу, конечным акцептором электронов в их дыхательном метаболизме служит молекулярный кислород (63, 87, 157, 173, 176,182,187). Оптимальной температурой роста В. subtilis является 37 + 1°С, минимальной - 5 - 20°С, а максимальной - 45 - 55°С. Реакция В. subtilis с яичным желтком отрицательная. Известно, что штаммы В. subtilis гидролизуют казеин и крахмал. Имеется ряд сообщений, раскрывающих положительные
- Київ+380960830922