2
СОДЕРЖАНИЯ
Введение 5
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Современные представления о вирусе болезни Аусски 9
1 2. Иммунитет и вакцинопрофилактика при болезни Ауески 14
1.3. Ретроспективная диагностика болезни Ауески 17
1.4. Технологические аспекты изготовления диагностических средств 22
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 29
2.1. Материалы • 30
2.2. Методы 32
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Разработка способа изготовления антигена вируса болезни Ауески 34
3.1.1. Изыскание различных культур клеток для получения биомассы
с высоким содержанием вируса-болезни Ауески 35
3.1.2. Разработка режимов инактивации вируса болезни Ауески 38
3.2. Разработка технологии изготовления антигенного эритроцитарного диагностикума для РНГА 43
3.2.1. Изготовление эритроцитарного реагента 43
3.2.2. Сенсибилизация эритроцитов сенситином 45
3.2.3. Определение активности и специфичности антигенных эритроци-тарных диагностикумов, изготовленных на основе разных антиге- ✓
нов вируса болезни Ауески 50
3.2.4. Испытание активности и специфичности серий эритроци гарных диагностикумов в межлабораторных опытах (комиссионно) 55
3.3. Применение РСК .для ретроспективной диагностики
болезни Ауески 57
3.3.1 Разработка способа получения комплсмснтсвязываюшего антигена
вируса болезни Ауески 59
3
3.3.2. Испытание активности и специфичности серий разработанного 67 антигена в РСК
3 4 Практическое использование существующих и разработанных методов и средств для иммунологического мониторинга эффективности вакцинопрофилактики при болезни Ауески 68
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ 76
ВЫВОДЫ ■ 86
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 87
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 88
ПРИЛОЖЕНИЯ
11
зия - 1,27-1,29 г/см\ константа седиментации 540 S.
По химическому составу вирус содержит 70 % белка, 6,5 % ДІПС, 22 % фосфолипидов, 1,5 % углеводов. Суммарное содержание гуанина и цитозина в вирусной ДНК составляет 74 %. В составе ДНК содержится: адснина 13,2, гуанина 37,0; цитозина 36,6; тимина 13,6 %. Нуклсоид вириона выполняет роль носителя генетической информации (В.А.Сергсев, В Г.Орляикин, 1983).
Вирусы отого рода проходят онтогенетический цикл развития в ядре и цитоплазме клетки. Нуклеокаисид формируется в ядре, а оболочка вириона -преимущественно в цитоплазме, включая, и мембранные элементы клетки .
Вирусная оболочка состоит из 9 структурных белков с мол.м. от 50 до 130 кД Восемь из них относятся к гликопротеинам. Эти гликопротеины включают gl, g II, который является комплексом протеинов На, lib, Не; gill, glV, gp 50 и gp 63. Другие важные белки, которые кодируются вирусным геномом, включают gx и гимидинкиназу (ТК).
Вирулентность вируса болезни Ауески контролируется генами, кодирующимися глнкопротеинамн gl, gill, gp 63 и ТК (G.Wittmann, 1989); gll, gill и gp 50 являются самыми главными в отношении индукции иммунитега (C.Sehreurs et. al., 1988; В Христова, 1989; В Morcin ct.al., 1989; HJ.Nauwynck, 1997)..
Вирус продуцирует образование вируснейтрализующих, комплементс-вязываюших и пренипнтирующих антител, которые можно обнаружить с помощью реакций нейтрализации (PH), связывания комплемента (РСК), диффузионной преципитации (РДП). Специфические комплементсвязывающие антитела появляются в сыворотке крови через 3 дня после заражения, и их тигр не снижается в течение 30-40 дней. Вируснсйтрализующие антитела появляются на 5-7 день, достигают максимума через 3-4 недели и титр их сохраняется от 1 года до 1.5 лет (В Н Сюрин и др., 1998) Вирусные гликопротеины Dl, D3 и gp 50 индуцируют развито вируснейтрализующей активности сывороточных антител. Динамика антнтелообразования после заражения
12
6-недельных поросят характеризовалась появлением на 5-7 сутки антител, преимущественно класса М, которые обнаруживались только в РИГА. Ви-руснейтралюующие антитела начинали появляться только с 12-го дня после заражения (В.Н.Сюрин и др., 1998).
Антигенных вариантов у вируса болезни Ауески не установлено (R К.Maes, M.D.Sussman et.al., 1997) Методом перекрестной иммунофлуоресценции установлено антигенное родство вируса болезни Ауески и простого герпеса (В.Н.Сюрин, Р.В.Белоусова. Н.В.Фомина, 1991). Изоляты вируса, выделенные в различных географических зонах США. существенно отличаются по антигенным свойствам гликопротеинов. В оболочке вируса болезни Ауески различают 3 основных гликопротеина: Dl, D2, D3. При инъекции свиньям антитела формируются ко всем гликопротеинам Гликопротеин DI состоит из 2 субъединиц с мол.м. около 80 кД - концевой фрагмент D1 содержит высокоактивный домен, способный вызвать образование вируснейт-рализующих антител и защитный эффект (В.А.Сергеев, 1993). Гликопротеин gl вируса болезни Ауески служит маркерным белком в вакцинах и соответствующих тест-системах При использовании 13 моноклональных антител к gl вируса болезни Ауески все они реагировали с gl-позитивными штаммами (К, Арский, ВГНКИ, БУК) в ИФА, но не реагировали с gl-негативными штаммами Barta, NLA-4). Установлено по крайней мере 8 эпитопов gl и выявлено их расположение (О С Моренков, 1995, С Marchioli, R.T Yancey et.al., 1988).
Наибольшее значение для разработки эффективных субъединичных вакцин имеет гликопротеин D3 (C.Schreurs, Т.Mettenleitcr, RZuckermann et.al., 1988). При отсутствии антигенных вариантов вируса болезни Ауески различия между некоторыми штаммами все же показаны с использованием моноклональных антител Кроме того штаммы вируса болезни Ауески могут быть дифференцированы с высокой степенью достоверности по биологическим и физическим маркерам Вакцинные, как и полевые штаммы, могут быть дифференцированы с использованием маркеров температуре- и трип-
- Київ+380960830922