2
Оглавление
Список сокращений...................................................5
Введение............................................................6
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ................................................10
1.1. Гипоксические состояния, их классификация и патогенез.........10
1.2. Возможные подходы к профилактике и коррекции гипоксических состояний................................................................15
1.2.1. Антигипоксанты, их классификация и основные механизмы действия................................................................16
1.2.2. Антигипоксическис эффекты антиоксидантов....................25
1.2.3. Фармакокоррекция гипоксических состояний средствами растительного происхождения...................................................29
1.2.4. Возможные пути повышения эффективности профилактики и терапии
гипоксических состояний............................................32
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ..................................35
2.1. Используемые реактивы и аппаратура............................35
2.2. Объекты исследования..........................................35
2.3. Способы воспроизведения экспериментальных моделей гипоксических состояний..........................................................36
2.4. Режимы введения...............................................37
2.5. Методы определения активности ферментов.......................38
2.6. Методы изучения свободнорадикальных процессов в экспериментах in vivo...............................................................39
2.7.Методы изучения свободнорадикальных процессов в экспериментах in vitro..............................................................39
2.8.Морфологический метод исследования.............................41
2.9. Статистическая обработка результатов..........................41
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.........................................42
з
3.1. Характеристика морфофункциональных изменений органов при постги-ноксическом состоянии.................................................42
3.1.1.Влияние гипоксического воздействия на функциональное состояние тканей печени и мозга.................................................42
3.1.2. Морфологическая структура головного мозга при постгипоксическом состоянии........................................................... 46
3.2. Коррекция гипоксических повреждений фитоэкстрактами..............56
3.2.1. Оценка антигипоксических свойств растительных средств..........56
3.2.2. Влияние растительных средств на содержание малонового диальдегида в гомогенатах мозга и печени..........................................59
3.2.3. Влияние фитоэкстрактов на уровень восстановленного глутатиона....62
3.2.4. Влияние фитоэкстрактов на активность каталазы..................64
3.2.5. Влияние фитоэкстрактов на активность сукцинатдегидрогеназы 66
3.3. Коррекция гипоксических повреждений комбинациями средств природного происхождения....................................................69
3.3.1. Оценка антигипоксических свойств комбинированных средств 69
3.3.2. Влияние комбинированных средств на содержание малонового диальдегида в гомогенатах органов..........................................72
3.3.3. Влияние комбинированных средств на активность каталазы в гомогенатах органов...........................................................73
3.3.4. Влияние комбинированных средств на уровень восстановленного глу-татиона в гомогенатах органов.........................................74
3.3.5. Влияние комбинированных средств на активность сукцинатдегидроген-зы................................................................... 76
3.3.6. Влияние комбинированных средств на морфологическую структуру
головного мозга в условиях постгипоксического состояния...............77
3.4. Исследование механизмов антигипоксического действия..............85
3.4.1. Влияние фитоэкстрактов на интенсивность генерации активных форм кислорода...........................................................85
12
1 стадия связана с инактивацией НАД-зависимого пути окисления и со-путствующим усилением сукцинатоксидазного пути (компенсаторная стадия гипоксии), хотя наиболее ранним ответом на гипоксическое воздействие является усиление интенсивности НАД*Н-зависимого пути окисления, сопровождающаяся, как правило, увеличением образования АТФ (Дудченко Л.И., 1994). Это явление рассматривают как первичную срочную
неспецифическую компенсаторную реакцию энергетического аппарата на снижение доставки кислорода к клетке (Лукьянова Л.Д., 1991, 1997). В настоящее время причины инактивации МФК I при гипоксии неизвестны. В связи с этим обсуждается несколько механизмов: 1) регуляция этого процесса активностью ферментов цикла трикарбоновых кислот и, в первую очередь, пируватдегидрогеназного комплекса; 2) роль в этом процессе внутриклеточного Са; 3) роль внутриклеточного pH; 4) роль NO-радикалов, возможность их комплексирования с компонентами МФК 1 и вытеснение ими негемового железа; 5) влияние активации свободнорадикальных процессов; 6) взаимодействие эндогенных токсичных продуктов с гидрофобными участками комплекса (Кольтовер В.К, 1996; Cassina А., 1996; Ioannidis I., 1996; Borutaite V., 1997; Lin Z., 1997; Bolanos J., 1998; Millar T.M., 1998; Воронина T.A., 2000; Лукьянова Л.Д., 2000; Малышев В.П., 2000).
Основными признаками, характерными для инактивации МФК1 являются: 1) снижение интенсивности окисления ИАД-зависимых субстратов и окислительного фосфорилирования, что приводит к накоплению ряда энергетических субстратов цикла Кребса (Хватова Е.М., 1980); 2) уменьшение чувствительности дыхания к специфическим ингибиторам НАД-зависимых участков дыхательной цепи; 3) восстановление дыхательных переносчиков МФК1 (пиридшшуклеотидов и флавинов) (Хазанов В.А., 1999).
Наряду с подавлением НАД*Н-зависимого пути окисления в дыхательной цепи активируются компенсаторные метаболические потоки, позволяющие сохранить энергосинтезирующую функцию цитохромного участка. Особую роль отводят сукцинатоксидазному пути окисления, благодаря активации
13
которого сохраняется транспорт электронов через цитохромный участок и способность к окислительному фосфорилированию (Корнеев A.A., 1996; Маевский Е.И., 2000). Лимитирующими факторами при этом, как правило, являются наличие достаточного количества янтарной кислоты и активность сукцинатдегидрогеназы.
При увеличении тяжести или длительности гипоксического воздействия, нарушения электронтранспортной функции дыхательной цепи последовательно распространяются от субстратного к цитохромному ее участку, на область цитохромов Ь- с - 2-я (некомиенсируемая) стадия биоэнергетической гипоксии, сопровождающаяся декомпенсацией энергетического обмена (Лукьянова Л.Д., 1991, 1997, 2000). На этой стадии ограничивается поток электронов от субстратных участков дыхательной цепи, что связано, видимо, с лабилизацией митохондриальной мембраны и утечкой переносчиков CoQ и цитохрома с (Корнеев A.A., 1985). В связи с этим, предполагается снижение активности цитохромоксидазы, что является причиной уменьшения содержания АТФ (Iliou J-P., 1995). Следует отметить, что в этот период наблюдается активация образования свободнорадикальных продуктов, появление продуктов деградации адениннуклеотидов (аденозин, инозин, гипоксантина) (Лукьянова Л.Д., 1997).
Тем не менее, полная инактивация цитохромоксидазы происходит только в аноксической области - 3 терминальная стадия биоэнергетической гипоксии. Именно в этот период увеличивается проницаемость мембран, усиливается процесс перекисного окисления липидов, а также деградация адениннуклеотидов, в связи с чем, полностью подавляется и дыхание, и окислительное фосфорилирование (Yanagiya N., 1994; Chandel N.S., 1997; Лукьянова Л.Д., 1997, 2000;).
Причиной митохондриальных нарушений, помимо дефицита кислорода, могут быть и токсические эффекты различных веществ экзогенного и эндогенного происхождения, называемых "ядами дыхательной цепи". Ранее, под тканевой гипоксией понимали только специфическое ингибирование цито-
- Київ+380960830922