Стандартизация травы фиалки и экстракта сухого, полученного на ее основе

2
ОГЛАВЛЕНИЕ
Стр.
ВВЕДЕНИЕ 5
Список используемых сокращений 11
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 12
1.1. Сведения о фиалке трехцветной и фиалке полевой 12
1.1.1. Морфологическая характеристика 12
1.1.2. Ареал и условия местообитания 13
1.1.3. Заготовка, сушка, хранение 13
1.1.4. Химический состав 14
1.1.5. Фармакологическое действие травы фиалки 18
1.1.6 Применение в медицине 20
1.2. Фармакологическое действие биологически активных веществ растительного происхождения и возможности их использования в качестве лекарственных средств 22
1.3. Современное состояние в области разработки сухих экстрактов 31
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 33
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 34
2.1. Объекты исследования 34
2.1.1. Вспомогательные материалы 35
2.2. Методы исследования 35
2.2.1 .Определение подлинности лекарственного растительного сырья 35
2.2.2. Определение числовых показателей 35
2.2.3.Качественный химический анализ биологически активных веществ 36
2.2.3.1. Качественные реакции 36
2.2.3.2. Хроматографический анализ биологически активных веществ 36
2.2.4. Количественное определение биологически активных веществ 37
3
2.2.5. Определение технологических показателей экстракта 41
2.2.6. Определение микробиологической чистоты 42
2.2.7. Определение острой токсичности 43
2.2.8. Определение противовоспалительного действия 43
2.2.9. Определение ранозаживляющего действия 44
ГЛАВА 3. СТАНДАРТИЗАЦИЯ И ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ГРАВЫ ФИАЛКИ 46
3.1. Стандартизация травы фиалки 46
3.1.1. Определение подлинности травы фиалки 46
3.1.2. Оценка качества сырья 47
3.2. Фитохимический анализ травы фиалки 48
3.2.1. Качественный анализ флавоноидов 49
3.2.2. Качественный анализ антоцианов 51
3.2.3. Качественный анализ полисахаридов 61
3.2.4. Качественный анализ аскорбиновой кислоты 61
3.2.5. Исследование аминокислотного состава травы фиалки 61
3.3. Количественное исследование БАВ травы фиалки 64
3.3.1. Количественное определение флавоноидов 64
3.3.2. Количественное определение антоцианов 68
3.3.3. Количественное определение полисахаридов 73
3.3.4. Количественное определение аскорбиновой кислоты 75
3.4. Исследование микроэлементного состава травы фиалки 77
3.5. Исследование микробиологической чистоты травы фиалки 79
ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА СПОСОБА ПОЛУЧЕНИЯ ФИАЛКИ ЭКСТРАКТА СУХОГО И ЕГО СТАНДАРТИЗАЦИЯ 82
4.1. Подбор оптимальных условий экстрагирования травы фиалки 82
4.1.1. Выбор экстрагента 82
4.1.2 Определения размера частиц 84
4.1.3. Определение соотношения сырье - экстрагент 85
14
1.1.4. Химический состав и оценка качества травы фиалки
Согласно литературным данным, химический состав фиалки трехцветной и фиалки полевой представлен различными группами биологически активных веществ. Одной из основных групп БАВ, выделенной из травы фиалки, являются флавоноиды. Флавоноидный состав представлен в основном производными флавона и флавонола (рутин, акацетин, витексин, виолантин, сапонаретина, ориентин, тамариксетин, изокверцитрин, гесперсдин, гиперозид, кверцетин-7-рамнозид, кверцетин-3,7-диглюкозид, мирицетин-3-рутинозид, астрагалин и др.) [20,36, 68, 131,173].
Трава фиалки трехцветной содержит от 2 до 4 % флавоноидов, из которых выделен рутин, количество которого составляет 41,53 % от общего числа флавоноидов в сырье [20]. Содержание рутина в подземных органах 0,05 %, в надземной части 0,15-0,45 %: в стеблях - 0,08-0,10 %, в листьях - 0,13-0,15 %, в семенах - следы. Минимальное содержание рутина в лепестках [37, 125, 177]. Фиалка полевая отличается меньшим содержанием флавоноидов 0,9-1,3 %, в цветках - следовые количества рутина [159].
Исследования, проведенные в Пермской государственной фармацевтической академии, показали, что содержание суммы флавоноидов составляет 2,35-3,97 % и 2,68-3,52 % в фиалке трехцветной и фиалке полевой, соответственно [137, 175]. При количественном определении экстрактивных веществ обнаружено в траве фиалки трехцветной 32,30 - 47,10 %; в траве фиалки полевой -32,49 - 46,71 %. В состав экстрактивных веществ от общей суммы флавоноидов в сырье переходит у фиалки трехцветной до 94,19 %, а у фиалки полевой до 88,06%. На основании проведенных исследований в ГФ XI (статья 62) включен показатель оценки качества сырья - содержание экстрактивных веществ, извлекаемых водой - не менее 30,0 % [137, 182].
В работах других авторов при определении суммы флавоноидов установлено их содержание в пределах от 2,19 до 4,15 % в траве фиалки трехцветной и от 2,21 до 4,10 % в траве фиалке полевой [19].
15
В литературных источниках встречаются данные о присутствии в цветках фиалки трехцветной антоцианов, таких как виоланин, 3 - глюкозид дельфини-дина, 3 - глюкозид пеонидина; в гидролизате: дельфинидин, цианидин [159].
В период цветения фиалки полевой наблюдается максимальное содержание фенольных соединений (1,6-2,2 %), более поздние сборы (с цветками и плодами) содержат до 0,6 % фенольных веществ. Наиболее богата фенольными соединениями верхушка озимой формы (4,03 %) и 1-3 узлы (3,22-3,09 %), содержание в цветковой части составляет 3,45 %, средняя часть (4-6 узлы) содержат 2,59-2,38 % фенольных соединений, нижняя часть (7-9 узлы) - 2,40-2,28 %. Сырьевая часть растения (длиной до 25 см), включающая 1-6 узлы, содержит на 1/3 больше флавоноидов, чем нижняя. Яровая форма фиалки в этих же условиях накапливает в 1,5-2 раза меньше фенольных соединений, т.е. ее заготовку целесообразнее проводить в первой половине лета [200].
Содержание дубильных веществ (в основном конденсированной группы) в траве колеблется от 1,71 до 5,70 %, наибольшее количество обнаружено в траве фиалки полевой, минимальное - в траве фиалки трехцветной. В корнях содержание дубильных веществ составляет 1,84-3,10 %, максимальное количество находится в корнях фиалки полевой [17, 19].
Углеводный комплекс фиалки трехцветной включает значительное количество водорастворимых полисахаридов. При определении гравиметрическим методом после фракционной экстракции и гидролиза содержание в траве фиалки О-галактуроновой кислоты, Е>-глюкозы, О-галактозы, И-ксилозы, Ь-арабинозы и Ь-рампозы составляет 8,5-12,3 %, пектиновых веществ (13-галак-туроновая кислота, 19-глюкоза, О-галактоза) - 4,6 % [51, 52].
Содержание водорастворимых полисахаридов (в % от массы абсолютно сухого сырья) составляет в траве фиалки трехцветпой 5,77-13,40, в траве фиалки полевой 5,90-11,74. Наибольшее количество полисахаридов в листьях 8,29-9,42 %, в плодах - 7,53 и 8,08 % фиалки трехцветной и фиалки полевой, значительное количество в цветках 5,43 и 7,09 %, наименьшее в стеблях 2,78 и 4,55