ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ ВНИИЗЖ - Всероссийской научно-исследовательский институт защиты животных; ВНИЯИ - Всесоюзный научно-исследовательский ящурный институт;
ВНА - вируснейтрализующие антитела;
ВНК - перевиваемая клеточная культура почки хомячка;
ВБ - вирус бешенства;
ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения;
ГОА ~ гидроокись алюминия;
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота;
ИД50 - 50%-ная инфекци-онная доза;
ИМД50 - 50%-ная иммунизирующая доза;
IBRS - перевиваемая клеточная культура;
ИФА - иммуноферментный анализ;
КРС - крупный рогатый скот;
МАТ - моноклональные антитела;
МЛД - мышиная летальная доза;
МН - микроноситель;
MPC - мелкий рогатый скот;
МФА - метод флюоресцирующих антител;
МЭБ - Международное эпизоотическое бюро;
ЛД50 - 50%-ная летальная доза;
Ig - логарифм при основании 10;
Iog2 - логарифм при основании 2;
СПЭВ - перевиваемая клеточная культура почки эмбриона свиньи;
РСК - реакция связывания комплемента;
ПЦР - полимеразная цепная реакция;
ПАК - полиакриловая кислота;
PH-реакция нейтрализации;
РПИФ - реакция прямой иммунофлюоресценции;
ТФ ИФА-твердофазный иммуноферментный анализ;
ТЦД50 - 50%-ная тканевая цитопатическая доза;
ЦПД - цитопашческое действие.
JJ - индекс иммуногснности вакцины
5
10
10
13
17
33
34
37
38
47
48
48
48
48
48
48
49
49
49
50
50
50
51
51
53
53
53
54
3
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ ...................................................
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ...........................................
Вирус бешенства и его свойства .............................
Эпизоотологические особенности бешенства ...................
Культивирование вируса бешенства ...........................
Очистка и концентрирование вируса бешенства ................
Инактивация вируса и инактиванты ...........................
Адъюванты и их использование в антирабических вакцинах......
Определение качества вакцин против бешенства ...............
Заключение но обзору литературы.............................
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ .
Материалы ................................................
Вирусный материал ..........................................
Культура клеток ............................................
Животные ...................................................
Питательные среды ..........................................
Оборудование ...............................................
Методы ...................................................
Культивирование клеток .....................................
Культивирование вируса бешенства в монослое культуры клеток
ВНК-21 .....................................................
Культивирование вируса бешенства в суспензии культуры клеток
ВНК-21 .....................................................
Освежение штамма и подготовка посевного материала ..........
Определение титра инфекционности вируса ....................
Оценка иммуногенной активности инактивированных вакцин
Определение титра вируснейтрализующих антител в сыворотке
крови ......................................................
Определение стерильности вируссодержащей суспензии, антигена
и вакцины ..................................................
Определение безвредности вакцины ...........................
Статистическая обработка результатов исследований ..........
12
Нуклеопротеин (N-протеин) состоит из трех белков, образующих вместе с РЫК спиралевидный нуклеокапсид. N-протеин является основным внутренним белком вируса.
Во время морфогенеза вируса N-протеин тесно связан с вирионной РНК, защищая ее от действия рибонуклеаз, при этом он связывается как с позитивной, так и с негативной геномной РНК, формируя позитивный и негативный РКП. В зрелом вирионе N- протеин является главным компонентом внутреннего спирального нуклеокапсида и выполняет функции инкапсидации и защиты генома, кроме этого он вовлечен в процесс регулирования транскрипции и репликации.
Аминокислотная последовательность N-протсина вируса бешенства была выведена от первичной нуклеотидной последовательности штаммов PV, CVS, ERA и SAD-B19 (217, 231). Последовательность N-протеина каждого из этих штаммов состоит из 450 аминокислот и отмечается их высокое родство (98% -99,6%), которое находится в определенном соотношении с их антигенным сходством, при анализе с использованием моноклональных антител (МАТ) (231). Одно исключение представляет N- протеин штамма Flary HEP, который не реагирует с 10 из 37 анти-N моноклональными антителами (231). Иследова-ния шести лиссавирусов, включая Lagos bat, Duvcnhagc, European bat type 1 и type 2 ( EBL 1 и EBL 2), показали полное аминокислотное сходство последовательностей N-протеина. Фосфолированный участок на N-протеииа помечен се-риновым остатком в позиции 389. N-протеин представляет главную мишень для Т-хелпер клеток.
Фосфопротеии (NS или Р протеин). Фосфопротеии состоит из 297 аминокислот и обладает высокой степенью гомологии между штаммами (92%-98%) (150). Фосфопротеии представлен в 2 формах М| и М2, отличающихся различной степенью фосфорилирования, которое сильно увеличивает общий заряд белка за счет высокого содержания аспарагиновой и глутаминовой аминокислот. Предполагается, что фосфопротеии нуклеокапсида играет роль инициации процесса транскрипции и репликации РНК.
13
Матричный протеин (М протеин). К нуклеокапсиду прилегает мембраноподобный слой толщиной 2,5-3,0 нм, представляющий собой нефосфорили-рованный матричный белок М. Он содержит 202 аминокислоты. Сравнение аминокислотной последовательности М- протеина штаммов вируса бешенства показало 91%-94% гомологии. М- протеин также содержит ковалентно связанную пальмитиновую кислоту. Антигенная структура М- протеина не исследована. Было сделано предположение, что, главная функция матричного протеина находится во взаимодействии с цитоплазматическим доменом гликопротеида и рибопуклеопротеином во время вирусной сборки.
РНК-зависимая РНК -полимераза (L протеин). L-протсин -наибольший протеин рабдовирусов и состоит у вируса бешенства из 2142 аминокислот. В его функции входит синтез, кепирование, метилирование и поли-аденилирование.
2.2. Эпизоотологические особенности бешенства
Классические вирусы бешенства в настоящее время широко распространены в мире, за исключением некоторых островных государств (Новая Зеландия, Англия, Япония) и континентов Австралии и Антарктиды. Нет этого заболевания и в ряде государств на севере (Норвегия, Швеция) и юге Европы (Испания, Португалия) (29, 72, 73, 181-185).
Вирус бешенства (генотип 1) поддерживается в природе межвидовой передачей практически повсеместно среди представителей Carnivora (дикие и домашние собаки, представители лисьих, куньих) и Microchiroptera (насекомоядные и кровососущие летучие мыши). В отличие от вируса бешенства, вирусы подобные ему имеют намного более ограниченное распространение (Африка и Европа). Круг поражаемых ими видов до конца не известен и, по-видимому, ограничен мелкими млекопитающими (грызуны, насекомоядные и плотоядные летучие мыши). Человек в этой цепи является лишь временным хозяином вируса (128).
Бешенство в Европе. За последнее столетие в Европе ситуация по бешенству значительно изменилась. После второй мировой войны произошла
- Київ+380960830922