2
ОГЛАВЛЕНИЕ
стр.
Список сокращений................................................4
1. ВВЕДЕНИЕ................................... .............6
1.1. Актуальность темы 6 •
1.2. Цель и задачи исследования-............................. 7
1.3: Научная новизна работы..........і..........................8’
1.4. Практическая значимость результатов исследований ..•..... 8-
1.5. Основные положения, выносимые на защиту.................... 9
1.6. Апробация работы и публикация результатов .................9
1.7. Структура и объём диссертации...........'.............. 10
21 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ........................................ 11
2.1. Морфологические и физико - химические характеристики вируса репродуктивно - респираторного синдрома свиней....................11
2.2. Эпизоотологиярепродуктивно- респираторного синдромахвиней-12
2.3. Патогенез репродуктивно - респираторного синдрома свиней- и
клиническое проявление болезни......; ...................... 18-
2.4.. Патоморфологические: изменения,, обусловленные вирусом
репродуктивно - респираторного синдрома свиней ..............20'р;..
2.5. Диагностика репродуктивно - респираторного синдрома свиней 22 ' 2:5;Г. Вирусологические методы, направленные на. выделение и; идентификацию вируса PPGG................................ 23*
2.5.2. Методы обнаружения антигенов вируса РРСС 25 '&•
2.5.3. Молекулярно - генетические методы ..................... 27
2.5.4. Серологическая и ретроспективная диагностика РРСС........29
2.5.5. Сравнительная оценка методов диагностики РРСС...........31'
2.6. Вакцинопрофилактика РРСС................................. 33
Заключение по обзору литературы................................35-
3. Собственные исследования.....................................40
3.1. Материалы и методы.........................................40
3.1.1. Животные-.............................................. 40-
3.1.2. Исследуемые сыворотки....................................40
3.1.3. Кислоты, основания, соли.................................40
3.1.4. Растворители.............................................40
3.1.5. Красители и хромогенные субстраты........................40
3.1.6. Реактивы ............................................. 40
3.1.7. Исходные водные растворы.................................40
311.8. Диагностические препараты................................41
3.1.9. Оборудование...................................... ;41
3.2. Подготовка проб.................................. і.....42
3.4. Серологические реакции............................... 43'
3.4.1. Твердофазный вариант ИФА (ТФ - ИФА, ELISA)...............43
3.4.2. Обратно - транскриптазная полимеразная цепная реакция (ОТ -ПЦР)..............................................................44
/ ■
3-
V
[. 3.4.2Л. Выделение вирусной РНК..................................;............................;...44
. З.4.2.2. Синтез к ДНК.....:.................................................................44
3.2.3.3. Постановка ПЦР:....................................................................45
3.4.4.4..3лектрофорез продуктов ПЦР.........................................................45
3.5. Методы окраски гистологических препаратов..............................................45
3.6. Статистическая обработка результатов исследований......................................45
4.Результаты собственных исследований.......................................................47
4.1. Ретроспективный анализ ситуации по РРСС................................................47
11 4.2. Серологический мониторинг РРСС восприимчивого поголовья
свиней Омской области.............................................................................................................51;
4.3. Изучение течения естественного инфекционного процесса, вызываемого ВРРСС у свиней в районах Омской области:........................................53
4.3.1. Анализ эпизоотологический ситуации* .................................................53
4.3.2. Клинические признаки болезни.........................................................55
4.3.3. Патоморфологическиечсские изменения в органах абортированных плодов, поросят раннего постнатального периода и свиноматок при репродуктивно - респираторном синдроме свиней... 56
4.3.4. Определение динамики накопления специфических антител к ВРРСС в сыворотках крови инфицированных животных.........;..................................83>...
• 4.3.5. Определение генотипа ВРРСС, циркулирующего в Омской области;........................:..........................'....:..85
4.4. Эпизоотологическое районирование Омской области в отношении ■: . ' заболевания, обусловленного ВРРСС......................................87
4.5. Среднесрочный эпизоотологический прогноз по РРСС для»
Омской области...........................................................................................................................90
5..0БСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ- ................................................................91ч
6. ВЫВОДЫ. ................................................................................ 105
7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ...................................... 107
Список литературы...........................................................................109
ПРИЛОЖЕНИЯ..................................................................................13 Г
!■
I
составе обнаружено шесть структурных белков - негликолизированный нуклеокапсидный белок N, негликолизированный трансмембранный белок М и четыре N - гликозилированных белка молекулярной массой от 25 до 50 KDa [85,115].
Вирус РРСС проявляет низкую устойчивость при воздействии неблагоприятных факторов окружающей среды. При температуре + 4°С сохраняет свои биологические свойства в течение месяца, при 21°С -порядка 6 суток, при 37°С - 1 - 2 суток, при 56°С — в течение 6 - 20 минут. Достаточно устойчив при pH окружающей среды от 6,5 до 7,5. Незначительные колебания значения pH в сторону повышения или уменьшения ведут к инактивации вируса [59, 60, 64]. Вирус полностью инактивируется при воздействии на него липидорастворяющими агентами — эфиром, хлороформом [59, 81, 83,114,153, 85].
Кроме вируса РРСС, к роду Arterivirus относятся вирус артериита лошадей, вирус геморрагической лихорадки' обезьян и- вирус, лактатде-гидрогеназы мышей [40, 32,21].
2.2. Эпизоотология рспродуктивно - респираторного синдрома свиней
2.2.1. Возникновение и распространение реп роду ктивно- респираторного синдрома свиней
Первый факт регистрации новой нозологической единицы -ВРРСС, который был установлен Carman et al. при ретроспективном исследовании сывороток крови свиней в Канаде, можно отнести к 1979 г. Авторам удалось обнаружить две серопозитивные к ВРРСС сыворотки крови свиней. По данным ретроспективного анализа в 1980 г. количество-серопозитивных сывороток составило уже 15,64%, а в 1982 г. - 18% от общего числа исследованных проб [68].
ІЗ
В 1986 г. впервые ретроспективный серологический диагноз на РРСС был установлен в США в штате Миннесота [161], и к моменту первых зарегистрированных случаев клинического проявления заболевания (1987 - 1988 гг.) число серопозитивных сывороток равнялось 47,57% от общего числа исследованных проб. В' 1990 г. заболевание регистрировали в 11 штатах США [97] с максимальным показателем серопозитивно реагирующих животных в северных штатах соответственно -в штате Мичиган 82%, в штате Айова 65%, в штате Огайо 50% [118]. В 1991 г. общее число неблагополучных по РРСС свиноводческих хозяйств в США составляло от 60 до 80 % [170].
Параллельно-с массовым распространением и регистрацией болезни на североамериканском континенте первый случай заболевания.свиней РРСС в Западной Европе был отмечен в 1990 т. в Германии [108]. Однако проведенный позже ретроспективный анализ сывороток крови-показал, что еще в 1988 - 1989 гг. свиньи, выращенные на территории Восточной Германии, имели контакт с возбудителем РРСС [124]:
За короткий промежуток временн о 1991 по 1996 гг. инфекция, вызванная ВРРСС, выявлялась в Бельгии, Великобритании, Франции, Голландии, Испании, Дании, Австрии, Северной Ирландии, Греции /56, 65, 90,134,150, 152, 154]. При этом специфические антитела к ВРРСС обнаруживались не только в сыворотках крови домашних, но также и в сыворотках крови диких свиней. Общее число серопозитивных диких животных составляло 0,3% от общего числа подвергнутых исследованию животных [127].
Примерно в это же время вспышки данного заболевания охватили ряд стран Восточной Европы - Словению, Чехию,' Польшу, Словакию [49,50у51,52,53,54/.
Вскоре после появления РРСС в странах Западной и Восточной Европы случаи возникновения инфекции были отмечены в свиноводчс-
/
/V
- Київ+380960830922