СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ЦП - церулоплазмин ДКВ - дигидрокверцетин ДР - доксорубицин Ст - стирол
ЫВПД - Ы-винилпирролидон
Ст-ЫВПД - (со)полимер стирола с Ы-винилпирролидоном Ст-4ВП - (со)полимер стирола с 4-винилпиридином НЬ - гемоглобин
СпА ЦП - специфическая активность церулоплазмина ПАК - полиамидокислота
Си-ПАК, Са-ПАК - модифицированные полиамидокислоты
СОДЕРЖАНИЕ
стр.
Введение...................................................... 6
ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР....................................11
1.1. Свойства церулоплазмина..........................11
1.1.1. Фармакологические свойства церулоплазмина...................................11
1.1.2. Структура молекулы церулоплазмина
и его основные биохимические свойства.......13
1.1.3. Физиологическая роль церулоплазмина
в организме.................................19
1.1.4. Регуляция обмена хмеди в организме........20
1.1.5. Антиоксидантиые свойства церулоплазмина 23
1.2. Способы выделения церулоплазмина.................26
1.3. Термодинамические и кинетические особенности взаимодействия белковых макромолекул
с лигандами........................................30
ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ...............................53
2.1. Получение и свойства церулоплазмина..............53
2.1.1. Количественное определение белка в препарате Церулоплазмин..........................53
2.1.2. Определение степени очистки...............53
2.1.3. Электрофорез на плёнках из ацетата целлюлозы........................................53
2.1.4. Иммуноэлектрофорез по методу СгаЬаг (ОгаЬаг/МШатБ, 1953)[97]..........................54
2.1.5. Гель-проникающая хроматография низкого давления..........................................54
2.1.6. Определение ферментативной активности......55
эндотелиальной синтазы оксида азота (Bianchini A. et al., 1999)[13] -ферментов, принимающих участие в регуляции сосудистого тонуса. Появились данные о нейро- и кардиопротективном эффекте ЦП (Mateescu М.А. et al., 1995; Dumoulin M.J. et al., 1996)[ 14,15]. Вышеперечисленные факты свидетельствуют о том, что функции ЦП в организме гораздо более разнообразны, чем считалось ранее, и спектр лечебного применения препарата может быть значительно расширен.
1.1.2. Структура молекулы церулоплазмина и его основные биохимические свойства.
Церулоплазмин (ЦП) - медь-содержащая оксидаза (КФ 1.16.3.1), принадлежащая к семейству мульти-медных оксидаз, которое включает лакказы растений и грибов, растительную аскорбат-оксидазу и дрожжевой Fet-3 (De Silva D. et al., 1997; Malmstrom B.G., 1997)[ 16,17]. Субстратами таких оксидаз являются марганец, железо, нитраты, билирубин, фенолы, аскорбиновая кислота. Отличительной чертой всех этих ферментов является присутствие различных медь-содержащих участков,
подразделенных на 3 типа на основании спектроскопических
характеристик (Malkin R., Malmstrom B.G., 1970)[ 18] (табл.1.1.; рис. 1.1.). Ионы меди I типа также называют «синими», поскольку именно они обуславливают характерную окраску белка из-за сильной электронной абсорбции при длине волны около 600 нм, вызванной переносом заряда между серой цистеина и ионами меди. Они расположены в составе тетраэдрической структуры, образованной при связывании с двумя молекулами гистидина и цистеина. Редокс-потенциал участков
связывания зависит от расстояния от четвертого аксиального лиганда, обычно метионина (Wittung-Stafshede P. et al., 1998)[ 19], или от растворимости и ориентации протеиновых диполей, окружающих участок связывания меди (Olsson М.Н., Ryde U., 1999)[20].
Рис. 1.1. Кристаллическая структура церулоплазмина человека №.М. ОіапеІа1.,2001)[21]
а) 6 доменов (Э) ЦП. медь обозначена красным цветом;
б) связывание меди в каталитическом ЦП.
Таблица 1.1
Характеристика активного центра церулоплазмина
Тип ионов меди Лиганды Электронный спектр (видимая область)
I («голубые») (О 2,4,6) 2 Ніб, 1 Суэ, 1 Меі ^■тах=61ОНМ
II (О 6) 4 Ніб ОТС.
111(0 6,1) ЗНІБ X =330нм
14
- Київ+380960830922