СОДЕРЖАНИЕ
Стр.
ВВЕДЕНИЕ...................................................5
1. Литературный обзор ....................................11
ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ ДОСТИЖЕНИЯ ГЕНОСИСТЕМА-ТИКИ РАСТЕНИЙ И НОВЫЕ ПЕРСПЕКТИВЫ ИЗУЧЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ............................11
1.1. Геносистематика и изучение лекарственных растений.....12
1.2. Полиморфизм лекарственных растений....................18
1.3. Современные методы исследования генома растений.......29
1.4. Манжетка обыкновенная (Alchemilla vulgaris L.) - агамный комплекс, источник перспективного лекарственного сырья.....48
1.4.1 Систематика рода AIchemilla L........................48
1.4.2 Характеристика агамиого комплекса........................51
1.4.3 Химический состав представителей рода м анжетка......58
1.4.4. Фармакологические свойства биологически активных веществ манжетки......................................60
1.4.5 Применение манжетки в традиционной в медицине........67
1.5.Систематическая и морфологическая характеристика
рода Anthyllis L........................................69
1.6. Выводы................................................74
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ....................................75
ГГ1АВАП. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.....................76
2.1. Объекты исследования......................:...........76
2.2. Методы исследования...................................80
2.2.1 Фармакогностические........................................................80
2.2.2 Хроматографические...................................81
2.3. Геномный анализ.......................................83
2.4. Анализ аминокислот и элементного состава..............89
2.5. Методы оценки острой токсичности и антиметастатической
11
f
I
активности...............................................93
2.6. Статистическая обработка результатов...................97
ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ ГЕНОМОВ ВИДОВ РОДА МАНЖЕТКА
ДЛЯ ИХ ХАРАКТЕРИСТИКИ КАК ИСТОЧНИКОВ
ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ...................99
3.1 Подбор условий амплификации, позволяющих проводить
иденти фикацию таксономически близких родов Agrimonia,
Potentilla и Alchemilla.....................................99
3.2. Оптимизация условий реакции амплификации ДНК видов
рода манжетка...........................................101
3.3. Определение степени изменчивости подмосковных видов
рода манжетка...........................................110
3.4. Выводы................................................117
ГЛАВА 4. ПРИМЕНЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНОТ>ИОЛОГИЧЕСКИХ
МЕТОДОВ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ И ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ 117
4.1. Применение RAPD-анализа для видоидентификации лекарственного растительного сырья...................................117
4.2. Применение секвенирования ДНК дли изучения лекарственных растений...................................................124
4.3. Филогенетический анализ...............................128
4.4. Анализ полученных данных о последовательностях........132
...4.5. Выводы................................................140
ГЛАВА 5. ХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ВИДОВ РОДА МАНЖЕТКА. .141
5.1. Сравнительное хроматографическое изучение видов рода манжетка...................................................141
5.2. Выделение агримониина.................................148
5.3. Фракционное изучение полифенолов травы манжетки.......151
3
систем размножения, которое с неизбежностью устанавливается у форм при переходе на апомиктичное воспроизводство, имеет место уникальная ситуация, ни с чем не сравнимая по сложности онтогенетической и морфолого-физиологической структуры популяции или совокупности популяций. При этом факультативно апомиктическая форма стремится ко все возрастающей сложности их структуры.Эта картина напоминает, вероятно, цепную реакцию, которая однажды начавшись, разрушительно действует на структуру вида.
Вместе с тем показано, что в условиях химического загрязнения среды ценопопуляции Taraxacum officinale s. 1 остаются неизменными: доля генеративной группы ценопопуляции достаточно постоянна и высока, что обуславливает благополучие ценопопуляции в условиях токсического стресса. Различия провляются лишь в резком колебании численности растений пре-генеративной фракции [71, 206].
Согласно нашим исследованиям загрязнение среды обитания в большой степени сказывается на появлении большого количества стерильных пыльцевых зерен. Для одуванчика в таких условиях средний показатель стерильности пыльцевых зёрен возрастает в 38 раз [26, 30, 37]. Эго только визуально фиксируемые отклонения, конечно связанные с возрастанием доли мутаций различного рода. Также возрастает и возможность их закрепления в популяции и изменение генотипов.
Так при длительном воздействии любого "жесткого" фактора могут формироваться локальные расы. Согласно В. Грангу (1984) - это популяции или системы популяций какого-либо вида, статистически отличающиеся по составу своих генофондов и по своим генетически детерминированным фенотипическим признакам от других популяций или систем популяций, относящихся к тому же виду [68].
Очевидно, что если корни одуванчика в таких условиях не будут содержать запредельные величины тяжелых металлов, радионуклидов и др., истинную доброкачественность сырья определить только фармакопюс-
26
тическими методами невозможно, потому что это будут уже другие виды, со своими видоспецифическими синтезами.
Установлено, что уровни плоидности многих растений в одних и тех же апомиктичных популяциях варьируют по годам, находясь в существенной зависимости от внешних условий. Само их одновременное присутствие в популяциях и в потомстве отдельных растений оказывается возможным благодаря динамическому равновесию апоамфимиктичных систем воспроизводства в различных комбинациях эуспории, апомейоза, партеногенеза и зиготии [79, 80].Это связано с тем, что в подавляющем большинстве случаев или всегда апомиксис встречается в природе не в облигатном, а в факультативном выражении, т.е. процесс "апомиктизации" формы, вероятнее всего, никогда не идет до конца. А это в свою очередь порождает всю сложность сочетаний путей реализации семенного воспроизводства. При этом апомиксис препочтительно реализуется на базе хромосомно несбалансированных геномов [109].
Ясно, что геномная изменчивость в той или иной мере обнаруживается во многих агамных комплексах покрытосеменных, истинные представления о масштабах этого явления до настоящего времени еще не сложились. Причиной этого служит недостаточная изученность явления на популяционном уровне, тем более, что до нас изучение геномной изменчивости лекарственных растений не проводилось [19-21, 25].
Особая задача при изучении полиморфизма состоит в выделении географических изолятов - популяций, обособленных от основной части видового ареала лекарственного растения. Важное значение имеет также нахождение гибридных зон с резко повышенной изменчивостью на границах обособившихся популяций или подвидов.
Границы между популяциями выступают достаточно отчетливо, если они имеют островной характер или отделены друг от друга трудно преодолимыми естественными преградами. При наличии у вида сплошного ареала выделение популяций оказывается часто затруднительным. Границы
27
- Київ+380960830922