2
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ........................................................... 6
ГЛАВА I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР................................. 11
1.1 Историческая справка................................... 11
1.2 Ботаническая характеристика ХегапІЇїетит аппиит Ь 12
1.2.1 Систематическое положение и географическое распространение рода ХегаШЬетит Ь................................ 12
1.2.2 Химический состав отельных представителей рода Хегап-
Фетит Ь................................................ 16
1.2.3 Применение представителей рода ХегапШетит Ь............ 18
1.3 Флавоноиды, их характеристика и методы исследования ... 19
1.3.1 Общая характеристика флавоноидов....................... 19
1.3.2 Распространение и накопление флавоноидов в растительном мире................................................... 21
1.3.3 Методы выделения, разделения и анализа флавоноидных
соединений............................................. 21
1.3.4 Биологическая активность флавоноидов................... 30
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ЛИТЕРАТУРНОМУ ОБЗОРУ................................ 36
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.................................... 37
ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ..................................... 37
ГЛАВА II. Качественное и количественное определение основных
групп биологически активных веществ (БАВ) в траве сухоцвета однолетнего.................................. 44
2.1 Качественные реакции................................... 44
2.2 Хроматографическое изучение БАВ травы сухоцвета однолетнего ..................................................... 45
2.2.1 Хроматографический анализ тритерненовых соединений ... 46
2.2.2 Хроматоірафический анализ флавоноидов и оксикоричных
кислот................................................. 48
2.2.3 Хроматографический анализ органических кислот.......... 55
2.2.4 Хроматографический анализ моносахаров.................. 56
2.2.5 Хроматоірафический анализ аминокислот.................. 57
2.3 Количественное определение БЛВ травы сухоцвета однолетнего ......................................................... 58
2.3.1 Количественное определение дубильных веществ............. 58
2.3.2 Количественное определение фенол карбоновых кислот .... 59
2.3.3 Количественное определение флавоноидов................... 61
2.3.4 Количественное определение антоцианов.................... 64
2.3.5 Количественное определение тритерпеноидов................ 65
2.3.6 Количественное определение аскорбиновой кислоты и
свободных органических кислот........................... 70
2.3.7 Количественное определение полисахаридов................. 73
2.3.8 Изучение аминокислот травы сухоцвета однолетнего 74
2.3.9 Изучение макро- и микроэлементного состава............... 77
ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ................................................... 80
ГЛАВА 111. Выделение и идентификация основных БАВ травы сухоцвета однолетнего................................................ 81
3.1 Фракционирование БАВ спиртоводного извлечения травы
сухоцвета однолетнего................................... 81
3.2 Выделение БАВ травы сухоцвета однолетнего............ 82
3.2.1 Выделение БАВ из петролейно-эфирной фракции........... 82
3.2.2 Выделение БАВ из хлороформной фракции................. 89
3.2.3 Выделение БАВ из эгилацетатной фракции................ 90
3.2.4 Выделение и количественное определение полисахаридов.. 92
3.3 Идентификация БАВ травы сухоцвета однолетнего.......... 96
3.3.1 Идентификация жирных кислот.............................. 96
3.3.2 Идентификация тритерпеновых соединений.................. 100
3.3.3 Идентификация полифенольных соединений.................. 107
3.3.4 Идентификация полисахаридов............................ 115
ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ.................................................... 119
ГЛАВА IV. Фармакологические исследования травы сухоцвета однолетнего ........................................................ 120
4.1 Изучение острой токсичности............................. 121
4.2 Изучение желчегонной активности экстракта сухоцвета
однолетнего............................................ 123
21
1.3.2 Распространение и накопление флавонондов в растительном мире
Флавоноиды широко распространены в растительном мире. Особенно богаты флавоноидами высшие растения, относящиеся к семействам Rosaceae (различные виды боярышников, черноплодная рябина), Fabaceae (софора японская, стальник полевой, солодка), Asteraceae (бессмертник нолевой, пижма обыкновенная), Polygonaceae, Lamiaceae и др. Данные БАВ обнаружены и у низших растений: зеленые водоросли, споровые (мхи, папоротники), хвощи (хвощ полевой), а также у некоторых насекомых (мраморно-белая бабочка) [14, 90, 96, 178]. Накапливаются флавоноиды в различных органах, но чаще в надземных: цветках, листьях, плодах; значительно меньше их в стеблях и подземных органах. В растениях флавоноиды встречаются в виде гликозидов и в свободном виде [21, 33, 183]. Они локализуются в клеточном соке в растворенном виде. Содержание флавоноидов в растениях колеблется от 0,5 до 5,0% и иногда достигает 20% (плоды софоры японской) [90, 139J.
Основными факторами, влияющими на накопление флавоноидов, являются возраст и фаза развития растения. Наибольшее количество их накапливается у многих растений в фазу цветения, а в фазу плодоношения уменьшается [35, 185]. Факторы окружающей среды (свет, почва, влага, высота над уровнем моря и др.) оказывают также значительное влияние на накопление флавоноидов. В южных и высокогорных районах, под влиянием света и на почвах, богатых микроэлементами, увеличивается содержание флавоноидов [58, 153].
1.3»3 Методы выделения, разделения и анализа флавоноидных соединений
МЕТОДЫ выдшшния.
Для флавоноидов, как и для многих других веществ, не существует стандартных методов выделения [12, 18, 31, 122]. В зависимости от свойств веществ, особенностей растительного сырья и ряда других факторов прибегают к наиболее подходящему из известных методов выделения: избирательная экстракция, противоточное распределение, осаждение солями тяжелых
22
металлов, хроматография, электрофорез и т.д. [80, 113, 146]. Для получения извлечения методом избирательной экстракции используют: метанол, водный этанол, этилацстат, эфир, ацетон, реже - горячую воду [17, 22, 74]. Удаление сопутствующих веществ (воски, масла, смолы, хлорофилл) проводят предварительной обработкой растительного сырья хлороформом, дихлорэтаном, петролейным эфиром или четыреххлористым углеродом [12, 165].
МЕТОДЫ РАЗДЕЛЕНИЯ И АНАЛИЗА ФЛАВОНОИДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ.
Бумажная и тонкослойная хроматография
Наиболее используемыми в практике анализа фенольных соединений являются хроматографические методы [18, 89, 153]. Простым и хорошо изученным методом разделения остается бумажная хроматография. Бумажная хроматография является идеальным методом разделения флавоноидных пигментов [21]. Ряд рекомендуемых систем приведен в таблице 2. Кроме того, подвижность флавоноидов на бумаге подчиняется строгим закономерностям. 11апример, с увеличением степени гидроксилирования подвижность этих соединений уменьшается во всех системах растворителей [7, 46, 136] .
Таблица 2 - Системы растворителей, предназначенные для бумажной хрома тографии полифенольных соединений
Состав систем растворителей Соотношение компонентов Разделяемые соединения
1 2 3
БУВ 4:1:5 и 4:1:2 Фенолы всех классов
н-Бутанол - этанол - вода 20:5:11 Большинство гликозилированных флавоноидов
и-Бутаиол-2 н. 1ІС1 1:1 Антоцианы
н-Бутанол - 2 н. NH4OH 1:1 Оксикоричные кислоты, кумарины, ксан-тоны, бифлавоноиды и простые фенолы
Фенол — вода 4:1 Многие флавоноиды, особенно частично метилированные производные
Бензол - пропионовая кислота — вода 2:2:1 Феиолкарбоновыс кислоты
- Київ+380960830922