СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АИГ антирабический иммуноглобулин
ИФ иммунофлуоресценция
ИФА иммуноферментный анализ
КГ конъюгат
КРС крупный рогатый скот
КС комплементсвязывающий
Ксп коэффициент специфичности
НАФ неполный адъювант Фрейнда
НТД нормативно-технические документы
ПАФ полный адъювант Фрейнда
ПХ иероксидаз(а)ный
ПЭС полиэтилсилаксан
PH реакция нейтрализации
РНК рибонуклеиновая кислота
РП реакция преципитации
РСК реакция связывания комплемента
РТ Республика Татарстан
С.-Х. сельскохозяйственный
УВБ уличный вирус бешенства
ФГУ ФЦТРБ Федеральное государственное учреждение
«Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных»
ЦНС центральная нервная система
ЭКСП. экспертиза
CVS Challenge virus standart (стандартный вирус бешенства)
3
ОГЛАВЛЕНИЕ
стр
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ................................... 5
1 Обзор литературы.............................................. 10
1.1. Биологические свойства возбудителя бешенства............. 10
1.2. Методы лабораторной диагностики бешенства.............. 12
1.3. Иммунитет при бешенстве и методы его оценки............... 21
1.4. Лечебно-профилактические средства от бешенства............ 25
1.5.Интерферон, индукторы интерферона и другие противовирусные препараты.................................... 32
2 Собственные исследования...................................... 39
2.1. Материалы и методы исследований.......................... 39
2.1.1. Материалы исследований................................. 39
2.1.2. Методы исследований.................г................... 41
3 Результаты собственных исследований........................... 46
3.1. Усовершенствование способа получения антирабической сыворотки крови овец и анализ её диагностической ценности
при изготовлении иммунохимических препаратов.............. 46
3.2. Изучение патогенных свойств эпизоотических изолятов вируса бешенства.................................................... 54
3.3. Изучение эффективности антирабического глобулина из сыворотки крови овец производства ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» при экспериментальном бешенстве.................................... 59
3.4. Получение препарата эндонуклеазы и определение его антирабического эффекта...................................... 64
3.5. Изучение антирабической активности циклоферона............ 74
3.6. Сравнительный анализ антирабической активности противовирусных препаратов при экспериментальном бешенстве... 77
13
иммуноферментный анализ и др.), либо на выделении рабического вируса (биопроба на лабораторных животных или в культуре клеток), а также на обнаружении генома возбудителя бешенства.
Световая микроскопия. Световую микроскопию проводят с целыо выявления телец Бабеша-Негри с применением мазков-отпечатков ткани мозга на предметном стекле и окрашивания с помощью красок по Селлерсу, Гимзе и Манну.
Лабораторная диагностика с помощью обнаружения телец Бабеша-Негри описана во многих обзорах и руководствах по бешенству (Селимов М.А., 1987; Таршис М.Г. и соавт., 1990; ВОЗ, 1996; Atanasiu Р., 1975) и этот метод вошел в повседневную практику как медицинских, так и ветеринарных лабораторий (Селимов М.А. и соавт., 1964; Ковалев Н.А.,1982; ГОСТ, 1984; Tierkel E.S., 1973). Однако, по данным ряда исследователей тельца Бабеша-Негри чаще обнаруживаются в стадии выраженной клинической картины болезни, поэтому у вынужденно убитых животных они могут отсутствовать или присутствовать в виде единичных, мелких включений (Tierkel E.S., 1973). Общепризнанно, что тельца Бабеша-Негри специфичны для бешенства и их присутствие является достоверным диагностическим признаком.
Однако необходимо отличать тельца Бабеша-Негри от телец-включений, характерных для других вирусных заболеваний, таких как чума или гепатит собак и энцефалит лисиц, а также артефактов, например, ацидофильных мелких включений у кошек и грызунов, особенно у белок, а также у собак, погибших в результате отравления змеиным ядом, или поражения электрическим током неспецифичных для бешенства (Фоменко М.В., Тутов И.К., 1997; Kantorovich R.A. et al., 1963, 1964; Baer G.M. et al., 1968; Jorgenson R.D., 1976).
Анализ данных литературы убеждает в том, что в мозге животных, больных или погибших от бешенства, не всегда удается обнаружить тельца Бабеша-Негри (Ведерников В.А. и соавт., 1974). Частота их выявления зависит
14
от продолжительности инкубационного периода, вида макроорганизмов, свойств штамма вируса бешенства.
Метод иммунофлуоресценции (ИФ) является наиболее точным из всех существующих ныне методов микроскопической диагностики бешенства (Топленинова К.А. 1961; Клюева Е.В., 1963, 1965 - 1967; Клюева Е.В., Селимов М.А. 1963, 1967, 1977; Грибанова Л.Я. и соавт., 1971; Бусыгин К.Ф. и соавт., 1975, 1983, 1984; Хисматуллина H.A. и соавт., 1995; ВОЗ, 1996). Наиболее удовлетворительным и используемым в практике для диагностики бешенства является прямой метод ИФ (Смирнова М.М., 1975; Шесточенко М.А. и соавг., 1979; Бусыгин К.Ф., 1983; Селимов М.А., 1985;). Согласно многим ученым, метод ИФ является специфическим методом и полученные им результаты совпадают с данными биологической пробы до 98,7% (Анина-Радченко Н.Д., 1979;; Недосеков В.В., 1998; Хисматуллина H.A., 2000; Komarov A. et al., 1959; Shneider L.G., 1969 и др.). Следует отметить, что были проведены исследования по обнаружению рабического антигена прямым методом ИФ для прижизненной диагностики бешенства (Ковалёв H.A., Шашенько A.C., 1970; Хисматуллина
H.A. и соавт., 2003; Zimmermann Th., 1971 и др.).
Реакция диффузионной преципитации (РДП) разработана и используется для лабораторной диагностики бешенства (Бучнев К.Н., 1963; Бусыгин К.Ф., 1964; Ваненков М.В.,1964; Коломакин Г.А., 1964, 1968, 1970; ГОСТ, 1984; Villemot J., 1958; Grasset N., 1961).
Показано, что реакция иммунопреципитации положительна только тогда, когда антиген и антитело присутствуют в соответствующей пропорции (Бучнев К.Н., 1968; Зибицкср Д.Е., 1968) и нередко дает ложноположительные результаты (Коломакин Г.А. и соавт., 1972; Фоменко М.В. и соавт., 1997).
Следует также иметь в виду, что мозг, консервированный в глицерине, формалине, ацетоне и спирте, для исследований в реакции преципитации не пригоден (Ведерников В.А., 1974; Анина-Радченко Н.Д., 1972; Ковалев H.A.,
1982).
- Київ+380960830922