ОГЛАВЛЕНИЕ
Список сокращений
1. Введение
1.1 Актуальнос ть темы
1.2 Цель и задачи исследований
1.3 Научная новизна
1.4 Практическая значимость работы
1.5 Основные положения, выносимые на защиту
1.6 Апробация и публикация результатов исследований
1.7 Личный вклад
2. Обзор литературы
2.1 Бешенство и его распространение
2.2 Вакцинопрофилактика и требования к фиксированным штаммам вируса бешенства
2.3 Технология получения вакцинных препаратов про тив бешенства животных Заключение по обзору литературы
3. Собственные исследовании
3.1 Материалы и методы
3.2 Результаты исследований
3.2.1 Селекция штамма
3.2.2 Патогномонические свойства штамма вируса бешенства для лабораторных животных
3.2.2.1 Патогенность для лабораторных животных
- Патогенность для мышей
- Патогенность для кроликов
- Патогенность для морских свинок
3.2.2.2 Индикация вируса в тканях
3.2.2.3 Цитоморфологические исследования
3
3.2.2.4 Инвазивность 45
3.2.3 Генетические маркеры штамма «РБ-71/10» 46
3.2.4 Иммунобиологические характеристики 48
3.2.4.1 Антигенные свойства 48
3.2.4.2 Иммуногенные свойства 50
3.2.5 Разработка технологии выращивания вируса 52
3.2.5.1 Стационарный метод культивирования 52
- Метод разового выращивания 52
- Метод периодической смены среды 54
3.2.5.2 Роллерный метод культивирования 56
3.2.5.3 Суспензионный метод культивирования 57
3.2.6 Приготовление экспериментальных образцов вирусвакцин 59
3.2.6.1 Подбор стабилизаторов 59
3.2.6.2 Хранение вакцин 62
3.2.6.3. Оценка безвредности и иммуногенности 63
3.2.7 Паспортизация штамма РБ-71/10 вируса бешенства 64
4. Обсуждение результатов 65
5. Выводы 74
6. Практические предложения 75
7. Литература 76
8. Приложения 97
• разработать технологию выращивания штамма «РБ-71/10» вируса бешенства в культуре перевиваемых клеток;
• изучить иммунобиологические свойства нового штамма «РБ-71/10» вируса бешенства па животных разного вида;
• паспортизировать основные характеристики нового штамма вируса бешенства и дать рекомендации по его применению.
1.3 Научная новизна результатов состоит:
- в обосновании и экспериментальном подтверждении возможности получения нового вакцинного штамма «РБ-71/10» вируса бешенства при экстремальном пассировании предельными разведениями;
- в обоснованном комплексном подходе к изучению патогенных, патогномон и ческих, иммунобиологических и других характеристик штамма «РБ-71/10» вируса бешенства;
- в разработке технологии культивирования штамма «РБ-71/10» вируса бешенства, пригодной для промышленного получения вирусного сырья;
- в подборе стабилизаторов для лиофилизации штамма «РБ-71/10» вируса бешенства и приготовлении пероральной вакцины.
1.4 Практическая значимость работы
1. Получен новый вакцинный штамм «РБ-71/10» вируса бешенства, обладающий пониженной, по сравнению с исходным штаммом, нейроиато-генностыо для лабораторных животных и сохранившего иммуногенные (антигенные) характеристики.
2. Разработан и апробирован новый технологический подход к выращиванию вирусного сырья с использованием стационарного или роллерно-го культивирования в перевиваемой линии клеток почки сайги.
3. Проведены паспортизация нового штамма «РБ-71/10» вируса бешенства в соответствии с требованиями ВОЗ (2003 г.) и депонирование в музее штаммов микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ (2007 г.).
9
1.5 Основные положения, выносимые па защиту
1. Штамм «РБ-71/10» вируса бешенства, полученный путём экстремального пассирования предельными разведениями.
2. Технология получения вирусного сырья (штамм «РБ-71/10») различными техническими методами в перевиваемых линиях клеток.
3. Иммунобиологические характеристики штамма «РБ-71/10» вируса бешенства (нейропатогенность, инвазивность, иммуногенноегь, антиген-ность, безвредность).
4. Паспортизация штамма «РБ-71/10» и рекомендации по его практическому использованию.
1.6 Апробации и публикации результатов исследований
Основные положения диссертационной работы отражены в итоговых отчетах ГНУ ВНИИВВиМ за 2005-2007 гг. по теме Россельхозакадемии
08.01.03.02 «Получение технологически перспективных штаммов вируса бешенства и разработка новых экологически безопасных средств специфической защиты сельскохозяйственных, домашних и диких животных». Материалы доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета ГНУ ВНИИВВиМ (2005-2007 гг.), а также на международных научно-практических конференциях (ВНИВИПФиТ, г. Воронеж, 2006; ВНИТИБП, г. Щёлково, 2006; ФЦТРБ, г. Казань, 2008). По теме диссертации опубликовано 5 статей, из них две в журнале Ветеринария (2006 и 2007 гг.) и три в сборниках международных научно-практических конференций (2006 г., 2008 г.). Результаты основных исследований подтверждены комиссионно (акт №10 от 17.10.2007 и акт №1 от 20.02.2008). Оформлен паспорт на вакцинный штамм «РБ-71/10» вируса бешенства (иив. №2705).
1.7 Личный вклад
Основная часть диссертационной работы выполнена автором самостоятельно, личный вклад составляет не менее 70%. При выполнении отдельных
- Київ+380960830922