4
7
7
7
11
13
15
15
19
21
24
28
35
35
35
35
36
36
38
40
41
2
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ..........................................................
ЧАСТЬ 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .......................................
Глава 1. Патогенетическая роль синегнойной инфекции...............
1.1. Распространение синегнойной инфекции, ее источники.....
1.2. Формы проявления синегнойной инфекции у
разных видов животных..................................
1.3. Ассоциативные формы синегнойной инфекции...............
Глава 2. Биологические свойства возбудителя синсгнойной инфекции..
2.1. Морфологические и культуральные свойства...............
2.2. Биохимические свойства возбудителя синегнойной инфекции ...
2.3. Серологическое типирование штаммов синегнойной палочки..
2.4. Чувствительность к антибактериальным препаратам........
Глава 3. Факторы патогенности синегнойной палочки и их роль в развитии
инфекционного процесса. Определения вирулентности на
лабораторных животных.....................................
ЧАСТЬ 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.................................
Глава 1. Материалы и методы.......................................
1.1. База исследований......................................
1.2. Объекты исследований и выделение Р.аеп^тоБа ..........
1.3. Методы идентификация Р.аеп^тоБа........................
1.3.1. Методы определения рода культур.................
1.3.2. Методы определения вида культур.................
1.3.3. Методы внутривидового определение типа культур..
1.4. Методы определения чувствительности синегнойной палочки к антибактериальным препаратам и бактериофагу ....
1.5. Методы определения факторов патогенности синегнойной палочки (экзотоксин А, протсолитические ферменты, внекле-
точная слизь, адгезивная способность, вирулентность для
лабораторных животных)....................................... 42
Глава 2. Результаты исследований
2.1. Инфицированность животных, контаминированность кормов
и объектов внешней среды Р.асп^тоБа в Краснодарском крае ... 46
2.2. Частота выделения Р.аеги$то8а в ассоциациях
с другими микроорганизмами....................................51
2.3. Биологические свойства изолятов Р.аепщтоБа, выделенных
из различных объектов.........................................52
2.3.1. Морфологическая характеристика полученных изолятов.... 53
2.3.2. Родовая идентификация изолятов Р.аеп^тоэа............. 56
2.3.3. Видовая идентификация выделенных культур.............. 59
2.3.4. Биохимическая и протеолитическая активность синегнойной палочки.......................................... 66
2.3.5. Серологическая характеристика Р.аеги^пска............. 70
2.4. Чувствительность синегнойной палочки к антибиотикам и бактериофагу........................................................77
2.5. Факторы патогенности синегнойной палочки..................... 86
2.5.1. Определение продукции экзотоксина А................... 87
2.5.2. Определение протеолитической активности Р.аеп^тоэа . 90
2.5.3. Определение экстрацеллюлярной (внеклеточной слизи)
у штаммов синегнойной палочки...........................92
2.5.4.Определение адгезивной активности Р.аеп^тоэа........... 94
2.5.5. Определение вирулентности на лабораторных животных.. 98
ГЛАВА 3. Обсуждение результатов исследования........................... 101
Выводы................................................................. 118
Практические предложения............................................. 120
Список литературы...................................................... 121
Приложения............................................................. 141
ГЛАВА 2. БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВОЗБУДИТЕЛЯ СИНЕГНОЙНОЙ ИНФЕКЦИИ
2.1. Морфологические и культуральные свойства
Согласно данным, приводимым в руководствах по систематике бактерий и в различных публикациях, посвященных изучению биологических свойств синегнойной палочки, последняя представляет собой палочковидный микроб, длина и ширина варьирует от 0,4-1,0 мкм до 0,8-2,5 мкм, что, вероятно связано с наблюдением в различные фазы роста бактерий [76, 126]. Ученые отмечают, что если в фазе логарифмического роста преобладали бактерии размером 0,4 х
1,0 мкм, то в стационарной фазе клетки уже имели размеры 0,6-0,7 х 1,2-2,2 мкм [74].
Р.аепщтоэа хорошо красятся анилиновыми красками [1, 14, 59, 67]. В мазках из чистой культуры бактерии просматриваются как одиночные, парные или в цепочках палочки. Они грамотрицательные, спор не образуют, подвижны, имеют один или два жгутика и различное число пилей - от 2 до 10. Пили представляют собой сократимые нити диаметром 6 нм и длиной 2,5 мкм. Они могут располагаться полярно или перитрихиалыю. Полярные пили возбудителя синегнойной инфекции могут служить рецепторами различных фагов и способны сокращаться. В пилях идентифицированы 4 антигенных участка [1, 99, 126]. Некоторые авторы описали наличие у Р.аеп^тоэа также 1-3 полярных, биполярных и боковых жгутиков. Наличие жгутиков, а, следовательно, и сам факт подвижности синегнойной палочки играет важную роль в идентификации этого вида, хотя из природных условий выделяются неподвижные изоляты различных штаммов Р.аепщшоБа [68].
По мнению одних авторов, клетки Р.аеп^тоэа с выраженной слизистой капсулой, которая выявилась при окраске по Гинсу [26]. По мнению других, бактерии синегнойной палочки истинной капсулы не образуют, но продуцируют слизь, которая тонким слоем окружает бактериальную клетку. Эта слизеподоб-
ная капсула состоит из внутреннего (ригидного) слоя, тесно связанного с клеточной стенкой, и наружного, более тонкого, на поверхности которого расположено много шаровидных образований [1]. Встречаются так называемые му-коидные штаммы, которые в любых условиях культивирования образуют повышенное количество слизи [117]. У бактерий, выделенных на кровяном агаре, наблюдается наличие микрокаисулы, шириной до 115 нм [68].
Цитоплазма Р.аспщтоэа имеет гранулярное строение, выявляются беспорядочно расположенные вакуоли и включения.
Ультраструктура клеточной стенки и мембраны Р.аегтщтояа характерен для грамотрицательных микроорганизмов [157]. В структуре клеточной оболочки синегнойной палочки, при изучении на ультратонком срезе, обнаружены: наружная мембрана, пеитидо-гликановый (муреиновый) слой и липопротеиновый слой. Все три слоя непраницаемы для потока электронов. Между клеточной оболочкой и цитоплазматической мембраной существует промежуток - периплазматическое пространство [127].
Липополисахарид (ЛПС) - важная составная часть наружной мембраны Р.аеп^шоБа, у возбудителя синегнойной инфекции выявлено около 20 О-серотипов. Поскольку О-серотиповая принадлежность служит стойким маркером, этот признак широко используется для типирования. У Р.аеп^тоБа выявлены своеобразие химического состава внешней мембраны и особенности строения клеточной стенки. Эти важные особенности имеют существенное значение в биологии ее пластичности, в приспособлении к меняющимся условиям внешней среды и находят свое отражение в своеобразии ее паразитизма [20].
Клетки синегнойной палочки, выделенные из различных источников, отличаются друг от друга. Так, выделенные от больных, по сравнению с выделенными от здоровых и из окружающей среды, имели менее контурное строение клеточной стенки, а в цитоплазме их обнаружены осмиофильные гранулярные включения и везикулярные структуры [38].
- Київ+380960830922