СОДЕРЖАНИЕ
1.ВВЕДЕНИ Е.......................................................5
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Иммунная система крупного рогатого скота: структурная и функциональная характеристика...........................................10
2.2. Иммуноглобулины крупного рогатого скота.....................17
2.3. Изотипы иммуноглобулинов: функциональные свойства...........22
2.4. Пассивная передача иммунитета...............................24
2.5. Количественные методы определения иммуноглобулинов..........30
2.5.1. Методы, основанные на реакции преципитации................30
2.5.2. Методы, основанные на использовании меченых антител или антигенов..............................................................32
2.6. Количественная характеристика иммуноглобулинов крупного рогатого скота................................................. 40
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Иммунологические реагенты...................................46
3.2. Испытуемые пробы биологического материала...................46
3.3. Реакция двойной иммунодиффузии по Оухтерлони (РДП)..........47
3.4. Метод радиальной иммунодиффузии по Манчини (РИД)............48
3.5. Методы иммуноферментного анализа............................48
3.6. Электрофорез в ПААГ-ДСН.....................................51
3.7. Иммуноблоттинг..............................................52
3.8. Синтез иммуноиероксидазных конъюгатов.......................53
3.9. Статистическая обработка результатов........................53
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1. Разработка «сэндвич»-ИФА на основе моноклональных антител для количественного определения ^А крупного рогатого скота.............56
4.1.1. Иммунологические реагенты, предназначенные
для использования в «сэндвич»-ИФА................................57
4.1.2. Иммунохимическая характеристика моноклональных
антител к IgA крупного рогатого скота............................58
4.1.3. Разработка «сэндвич»-ИФА на основе моноклональных антител
к крупного рогатого скота........................................64
4.2. Разработка РИД на основе моноклональных антител для количественного определения ^А крупного рогатого скота........................71
2
4.3. Сравнительная оценка эффективности «сэндвич»-ИФА и РИД но определению уровня в биологических жидкостях крупного рогатого скота........................................................75
4.4. Количественная характеристика иммуноглобулинов в-, М- и А-изотипов в биологических жидкостях коров................82
4.5.Возрастная динамика иммуноглобулинов у телят..........85
5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ............................................ 89
6. ВЫВОДЫ.................................................95
7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ...............................97
8. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.......................98
3
разработка на их основе «сэндвич»-ИФА и РИД для определения уровня иммуноглобулинов А-изотипа в биологических жидкостях крупного рогатого скота;
- результаты сравнительных исследований по изучению количественной характеристики и динамики содержания иммуноглобулинов отдельных изотипов в биологических жидкостях у коров после отела (сыворотка крови, молозиво, молоко, носовые секреты, слезная жидкость) и у телят после рождения (сыворотка крови, носовые секреты, слезная жидкость).
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на Всероссийских научно-практических конференциях (Щелково, 2000; Омск, 2004), Ученом совете ВИЭВ (2002), межлабораторном совещании сотрудников ВИЭВ (2005).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 109 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, собственных результатов исследований, заключения, выводов, практических предложений, списка цитированной литературы. Материалы диссертации иллюстрированы 12 таблицами и 4 рисунками. Список литературы включает 205 источников (64 отечественных и 141 зарубежных).
9
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Иммунная система крупного рогатого скота: структурная и функциональная характеристика
Популяция крупного рогатого скота составляет приблизительно 1,2 миллиарда голов, из которых около 70% находится в развивающихся странах. Отрасль животноводства - один из мощных источников мяса в мире из-за способности жвачных переваривать клетчатку, превращая ее в энергию и белковые продукты высокой пищевой ценности. Для поддержания оптимальной производительности, реализации генетического потенциала роста и развития крупный рогатый скот должен быть защищен от инфекционных болезней. В связи с этим постоянно существует необходимость изучения механизмов иммунной защиты у крупного рогатого скота на различных этапах онтогенеза, идентификации важнейших иммунопротективных антигенов патогенов для производства эффективных вакцин и средств иммунокоррекции. Структура плаценты крупного рогатого скота непроницаема для иммуноглобулинов, поэтому передача материнского иммунитета новорожденным осуществляется через молозиво матери. При этом необходимо знать закономерности этой передачи, иммунологический состав молозива и роль его отдельных компонентов в защите новорожденных животных, функциональное состояние отдельных звеньев иммунной системы в различные возрастные периоды. Бурное развитие иммунологии крупного рогатого скота началось с 1985 года с акцентом на идентификацию и функциональную характеристику популяций лимфоцитов. Затем внимание исследователей было направлено на изучение цитокинов, их идентификацию с использованием ИФА на основе моноклональных антител и ПЦР. Среди основных причин гибели крупного рогатого скота - травмы, инфекции, опухоли и дегенеративные болезни. Из них только инфекции и травмы регулярно вызывают гибель особей до достижения репродуктивного возраста, ослабляя тем самым генофонд вида и нанося колоссальный экономический ущерб. Поэтому защищающие от их последствий механизмы - иммунитет и заживление - особенно важны
10
- Київ+380960830922