Характеристика гуморальных факторов противовирусного иммунитета у собак в процессе поствакцинального иммуногенеза

СОДЕРЖАНИЕ
1. ВВЕДЕНИЕ.........................................................5
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Иммунная система собак: основные понятия......................10
2.2. Иммуноглобулины и гуморальный иммунный ответ
у собак............................................................27
2.3. Особенности иммунопрофилактики инфекционных
болезней собак.....................................................37
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Экспериментальные животные....................................48
3.2. Гематологические методы.......................................49
3.3. Метод радиальной иммунодиффузии по Манчини....................49
3.4. Реакция непрямой гемагглютинации..............................50
3.5. Реакция торможения гемагглютинации............................50
3.6. Реакция нейтрализации.........................................51
3.7. Иммуноферментные тест-системы.................................51
3.8. Электрофорез в ПААГ-ДСН.......................................52
3.9. Иммуноблоттинг................................................53
3.10.Статистическая обработка результатов..........................54
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1. Отработка методов непрямого твердофазного ИФА для выявления изотип-специфических антител к
парвовирусу и аденовирусам собак...................................56
4.2. Характеристика гуморальных факторов противовирусного иммунитета у собак в процессе поствакцинального
иммуногенеза.......................................................65
4.2.1. Гематологические исследования
экспериментальных животных.........................................66
4.2.2. Количественная характеристика иммуноглобулинов
сыворотки крови вакцинированных собак..............................72
4.2.3. Характеристика вирус-специфического гуморального иммунного ответа у собак в процессе
поствакцинального иммуногенеза.....................................80
4.2.3.1. Динамика содержания антител к
вирусу чумы собак..................................................81
4.2.3.2. Динамика титра и оценка распределения 1§М- и специфических антител в иммунном ответе
к парвовирусу собак................................................84
2
4.2.3.3. Динамика титра и оценка распределения ^М- и специфических антител в иммунном ответе
к аденовирусам собак......................................89
4.2.3.4. Корреляционный анализ результатов РИД и ИФА......95
5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ.............................................97
6. ВЫВОДЫ................................................108
7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ..............................110
8. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ......................111
3
и лимфатическими сосудами, по которым осуществляется рециркуляция лимфоцитов.
Клетки иммунной системы происходят от общего предшественника-стволовых клеток, находящихся в костном мозге и постоянно самообновляющихся в течение всей жизни. Стволовые клетки являются плюрипотент-ными клетками- предшественниками, которые дифференциируются в более специализированные клетки- предшественники. В процессе гематопоэза из них развиваются различные линии зрелых клеток.
'Гак из гематопоэтической стволовой клетки развивается общая мисло-идная и общая лимфоидная клетки- предшественники. Лимфоидный предшественник порождает Т- и В- лимфоциты, натуральные клетки- киллеры (ЫК-клетки), миелоидный- мегакариоциты (предшественники тромбоцитов), гра-нулоциты (нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, полиморфноядерные лейкоциты), тучные клетки и моноциты, которые превращаются в макрофаги. Эритроидная линия продуцирует красные клетки крови.
Созревание и дифференцировку клеток иммунной системы обеспечивают цитокины, которые стимулируют клетку- предшественник путем связывания с ее поверхностными рецепторами. Цитокины являются одним из важнейших факторов иммунологической защиты организма и представляют собой белки, продуцируемые многими типами клеток иммунной системы, стимулирующие их пролиферацию и участвующие в развитии отдельных этапов иммуногенеза. К ним относятся интерлейкины (ИЛ), колониестимулирующие факторы (КСФ), интерфероны (ИФП), фактор некроза опухолей (ФИО), кемокины и др.
У собак, также как и у других видов животных и человека, все клетки иммунной системы отличаются друг от друга по наличию на их поверхности различных антигенов, являющихся гликопротеинами клеточной мембраны, называемых кластером дифференциации или СЭ-антигенами (К.УатазЬка с соавт., 1994).
И
2.1.2. Онтогенез иммунной системы собак Период беременности у собак составляет в среднем 58-63 дня. В течение первых недель эмбриогенеза начинает формироваться иммунная система. При этом система лимфоидных органов и тканей развивается в определенной последовательности. Как и у других млекопитающих, стволовые клетки иммунной системы происходят из желточного мешка. После нескольких недель беременности, печень плода и позднее костный мозг становятся основным источником этих недифференцированных клеток. На 28-й день после зачатия у плода обнаруживается тимус, в котором к 35-му дню можно обнаружить предшественники Т-клеток. Способность к отторжению кожного аллотрансплантата появляется на 40-й день беременности, в то время как синтез антител на эритроциты барана не регистрируется до 48-го дня. Сплено-циты плода впервые отвечают на фитогемагглютинин (ФГА) на 45-й день развития, в то время как тимоциты- на 48-й. Лимфоциты периферической крови способны эффективно отвечать на ФГА только на 2-й день после рождения. Более того, к выраженному иммунному ответу способны щенки, по меньшей мере, в 6-ти месячном возрасте. Таким образом, иммунная система собак является не полностью созревшей при рождении и развивается позднее. Поэтому в ранний постнатальный период главную роль в защите организма щенка от инфекций играет материнский иммунитет, обусловленный передачей новорожденному материнских антител с молозивом и молоком (см. соответствующий раздел).
2.1.2. Естественный (врожденный) и приобретенный иммунитет Здоровый организм защищает сам себя от чужеродных агентов с помощью различных механизмов. Все эти защитные механизмы являются не-специфическими, т.к. они эффективны против различных патогенов, но не требуют их первичного воздействия для индукции, не усиливаются после вторичного воздействия чужеродных макромолекул и не различают их среди большинства чужеродных субстанций. Врожденный иммунитет, как следует из названия, присутствует при рождении и сохраняется всю жизнь. Он пред-
12