2
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ........................................................ 8
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.............................................. 17
1.1. Изменчивость бруцелл....................................... 17
1.2. Антигенная структура бруцелл............................... 24
1.3. Иммунодиагностика бруцеллеза животных, инфицированных
типичными и измененными вариантами бруцелл.................. 30
1.4. Дифференциальная диагностика больных бруцеллезом
животных от иммунизированных противобруцеллезными вакцинами................................................. 50
1.5. Диагностика инфекционного эпидидимита баранов.............. 60
1.6. Диагностика бруцеллеза собак, вызываемого В.сагш........... 70
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ...................................... 78
Материалы и методы исследования............................. 78
2.1. Концепция оптимизации диагностики болезней, вызываемых у
животных бруцеллами......................................... 80
2.2. Усовершенствование бактериологической диагностики
бруцеллеза у животных, сенсибилизированных измененными формами бруцелл............................................. 82
2.2.1. Отбор штамма бруцелл для производства Л-бруцеллезной агглютинирующей сыворотки........................................ 83
2.2.2. Изыскание схемы гипериммунизации крупного рогатого скота
и кроликов с целью получения Я-бруцеллезной сыворотки 87
2.3. Разработка биологического метода диагностики бруцеллеза у
животных, инфицированных диссоциированными формами бруцелл..................................................... 96
з
2.3.1. Изучение чувствительности R-бруцеллсзного цветного антигена для РА в опытах на морских свинках.................... 97
^ 2.4. Изучение антигенной структуры бруцелл с применением S- и
R-бруцеллезных диагностикумов............................ 105
2.4.1. Результаты изучения антигенной структуры разных серий вакцины из штамма 82........................................... 106
2.4.2. Результаты изучения биологических свойств культур бруцелл, выделенных от крупного рогатого скота, иммунизированного штаммом В.abortus 82............................................... 108
4« 2.4.3. Опыты на крупном рогатом скоте по изучению антигенных
свойств штаммов бруцелл...................................... 112
2.4.4. Разработка методики количественного содержания S- и R-
компонентов в антигенной структуре бруцелл................... 116
2.5. Изучение диагностической ценности реакции иммунофлюоресценции (РНИФ и РИФ) при индикации и идентификации измененных форм бруцелл.......................... 118
2.5.1. Испытание РНИФ при индикации и изучении антигенной
® структуры бруцелл............................................ 118
2.5.2. Разработка R-бруцеллезных люминесцирующих
иммуноглобулинов, изучение их свойств........................ 121
2.6. Изучение диагностической ценности R-бруцеллезного
антигена для РСК............................................. 128
2.6.1. Специфичность антигена.................................. 129
2.6.2. Изучение чувствительности R-бруцеллезного антигена в
экспериментах на лабораторных животных и крупном рогатом скоте........................................................ 129
*
2.6.3. Производственные испытания R-бруцеллезного антигена 130
2.6.3.1. Испытание R-бруцеллезного антигена на непривитых
45
неблагополучных стадах (Н.П. Лазарев, 1968).
На показатели KP влияет кислотность молока (В.И. Карташева, И.И.Архангельский, 1965), по их мнению, для исследования пригодно молоко с кислотностью выше 30-34° по Тернеру.
Отдельные исследователи изучали показания KP в зависимости от жирности молока (П.А. Триленко, 1951; Г.Д. Ручий, 1956). Авторы считают, что более пригодны для исследования первые порции удоя молока, показания KP на 8,0-18,0% выше, чем при исследовании последних порций, что связано с содержанием жира.
Физиологическое состояние коров также влияет на показания KP. В мо-лозивный период, как считают G.S. Ferguson, A. Robertson (1960), KP может давать положительный результат у здоровых коров.
Кроме того, на показатели KP могут влиять клинические и субклиниче-ские формы маститов различной этиологии (О.И. Морякова, А.Н. Касьянов, 1961), однако отдельные исследователи (F. Anczykowski, 1969 и другие) считают, что маститы обуславливают нехарактерные реакции. Противоположное мнение высказано Т.Г. Поповой (1987), по ее данным маститы не влияют на показания KP с молоком.
За рубежом KP с молоком широко применяется для контроля за благополучием по бруцеллезу молочных стад. В качестве экспертного тест используется в Англии, Австралии, Канаде, США, Германии, Индии, Израиле (S.N. Panda, М. Mishra, 1963; М. Haufe, 1970; G.Mc Keown, 1975; D.D. Miller, 1975; K.F.Wells, 1970; L. Bercovich, A. Molrman, 1980; D. Ian Huber, P. Nicoletti, 1986;
I. Dafni, G. Hoyda, 1989).
Необходимость более полного выявления больных бруцеллезом животных на всех стадиях инфекционного процесса побудила ученых к разработке новых иммунологических методов диагностики бруцеллеза, способных выявлять минимальное количество антител: радиоиммунологический метод (РИМ), нитроксильный иммунологический метод (СИМ). Несмотря на их высокую
чувствительность, эти методы обладают и существенными недостатками: для их осуществления необходимо дорогостоящее оборудование, реагенты довольно быстро разрушаются.
Наиболее широко при бруцеллезе людей и животных за рубежом и в нашей стране применяется ИФА, распространенным вариантом которого является твердофазный метод.
Специфический антиген или антитело связывается с адсорбированном на поверхности лунок полистироловых планшетов антителами (или антигеном), в результате чего образовавшийся комплекс антиген-антитело вступает в реакцию с меченными ферментами иммуноглобулинами антивидовой сыворотки. Образовавшийся комплекс выявляют путем добавления субстрата фермента. Наиболее часто в качестве метки для изготовления конъюгатов используют пе-роксидазу из хрена.
При бруцеллезе крупного рогатого скота метод достаточно изучен за рубежом (Н.Е. Carison et al., 1975; V.L. Lamb et al., 1979; L.B. Tabatabai, 1984; K.Nielsen et al., 1987; I.S. Wu, 1987; P. Chand et al., 1989; N.K. Mahajan, 1990; R.Vogel, H.P. Krause, 1990; J. Kita et al., 1991; C.O. Thoen, 1995). В основном, все авторы считают, что метод имеет высокую диагностическую ценность и позволяет выявлять дополнительно к различным традиционным диагностическим тестам: РА, РСК, РБП, РИГА, KP с молоком животных, реагирующих на бруцеллез.
Вместе с тем следует отметить, что отдельные исследователи отмечали и недостаточную чувствительность ИФА в сравнении с классическими серологическими тестами. Например, Т. Byrd et al. (1979) и R. Ruppaner (1980) считают, что чувствительность ELISA ниже, чем РА, но выше в сравнении с РСК.
В соответствии с данными Т.Е. Butler et al. (1981), P. Hinchlifle (1983) ELISA менее чувствительный тест, чем метод Кумбса.
В нашей стране значительный вклад в изучение диагностической ценности ИФА при бруцеллезе людей внесли М.М. Желудков, И.П. Павлова,
- Київ+380960830922