2
ОГЛАВЛЕНИЕ
1 Введение.....................................................6
1.1 Актуальность темы............................................6
1.2 Цель н задачи исследований...................................7
1.3 Научная новизна работы.......................................8
1.4 Личный вклад соискателя......................................8
1.5 Практическая значимость результатов..........................8
1.6 Апробация работы.............................................9
1.7 Публикация результатов.......................................9
1.8 Основные положения, выдвигаемые на защиту....................9
2 Обзор литературы............................................11
2.1 История изучения болезни Тешена.............................11
2.2 Распространение болезни Тешена..............................13
2.3 Таксономическое положение вируса болезни Тешена.............15
2.4 Морфология и физико-химическая характеристика
возбудителя болезни Тешена..................................16
2.5 Пути заражения свиней вирусом болезни Тешена................17
2.5.1 Экспериментальная инфекция..................................17
2.5.2 Естественное заражение......................................18
2.6 Патогенез, клинические признаки и
натоморфологическис изменения при болезни Тешена............20
2.7 Моделирование инфекционного процесса на
лабораторных животных.......................................23
2.8 Диагностика болезни Тешена..................................26
2.9 Дифференциальная диагностика болезни Тешена.................26
2.10 Профилактика и ликвидация болезни Тешена....................28
2.11 Перснстенцня вирусов в организме животных...................32
2.12 Заключение но обзору литературы.............................36
3 Собственные исследования....................................39
3.1 Материалы...................................................39
3.1.1 Вирусы......................................................39
3.1.2 Вакцины.....................................................39
3.1.3 Животные....................................................40
3.1.4 Культуры клеток.............................................40
3.1.5 Питательные среды и добавки к ним...........................40
3.1.6 Сыворотки крови.............................................40
3
3.1.7 Реактивы.........................................................41
3.1.8 Оборудование.....................................................41
3.2 Методы...........................................................42
3.2.1 Получение сывороток крови........................................42
3.2.2 Определение уровня вируснейтрализующнх антител к
вирусу болезни Тешена в сыворотке крови животных в реакции нейтрализации...........................................43
3.2.3 Получение вируссодержащего материала.............................43
3.2.4 Вирусовыделение из исследуемого материала........................43
3.2.5 Титрование вируса болезни Тешена.................................44
3.2.6 Идентификация вируса болезни Тешена в реакции
нейтрализации...................................................45
3.2.7 Постановка прямого метода . гистохимического иммуноферментного анализа для мазков-отпечатков на основе моноклональных антител к вирусу болезни Тешена....................45
3.2.8 Выделение РНК вируса болезни Тешена из
инфицированных клеток культуры ПТП и проб патологического материала.......................................46
3.2.9 Постановка полимеразной цепной реакции...........................46
3.2.10 Статистическая обработка результатов.............................46
3.3 Результаты собственных исследований..............................47
3.3.1 Мониторинг болезни Тешена в Российской Федерации.................47
3.3.1.1 Результаты серологического мониторинга болезни Тешена............47
3.3.1.2 Результаты вирусологического мониторинга болезни Тешена в
Российской Федерации............................................50
3.3.2 Изучение серологического родства изолятов «Навля-96» и
«Закарпатский» вируса болезни Тешена в реакции нейтрализации...................................................52
3.3.3 Дифференциация штаммов «Навля-96» и «Закарпатский»
вируса болезни Тешена методом ПЦР...............................53
3.3.3.1 Межштаммовая дифференциация штаммов «Навля-96» и
«Закарпатский» вируса болезни Тешена методом полимеразной цепной реакции..................................................55
3.3.4 Определение восприимчивости различных видов животных
к заражению вирусом болезни Тешена..............................57
3.3.4.1 Изучение персистенции вируса болезни Тешена в организме
различных видов животных........................................58
Исследования на кроликах........................................60
Исследования на крысах..........................................61
Исследования на собаках.........................................62
Исследования на морских свинках.................................64
3.3.4.2 Определение уровня вируснейтрализующнх антител у
животных, заражённых вирусом болезни Тешена.....................66
13
Новая волна интереса к этой группе вирусов появилась в связи с быстрым развитием генной инженерии, когда стало возможным исследовать строение и свойства вирусного генома, определять нуклеотидную последовательность рибонуклеиновой кислоты вирусов.
В результате проведенных исследований в этом направлении было показано, что вирусы группы Тешена не являются истинными энтеровирусами (Doherty М. et al., 1999; Kaku Y. et al., 1999; Kaku Y. et al., 2001). Отмечая это, в дальнейшем, в настоящей работе мы использовали название «вирус болезни Тешена».
*
2.2 Распространение болезни Тешена
С момента установления на территории Чехословакии, болезнь Тешена наносила огромный ущерб свиноводству. Смертность свиней достигала 80-100%, отчего ее тогда называли «Богемская чума». Затем болезнь была зарегистрирована на территории Австрии. Фактором, способствующим распространению болезни за пределы Чехословакии и Австрии, явилось повсеместное нарушение обычных ветеринарно-санитарных правил, связанных с началом второй мировой войны. В 1937-1957 гг. се регистрировали в США, Бразилии, Канаде, с 1947 г. - в Африке (о. Мадагаскар) В результате, к 1964 году болезнь была зарегистрирована почти во всех странах Западной и Восточной Европы (Pilet E., 1952; Fischer K., 1958; Metianu Т., 1979). С 1993-1995 гг. случаи заболевания стали выявлять в Азии (Лаос, КНДР), а так же вновь в странах Восточной Европы.
По данным МЭБ за период 1996-2001 гг. болезнь не регистрировалась на территории Андорры, Болгарии, Франции, Греции, Гренландии, Исландии, Италии, Люксембурга, Нидерландов, Испании, Турции, Великобритании при отсутствии каких-либо профилактических мероприятий. Вспышки болезни Тешена в этот период зарегистрированы в 1997 г. в Латвии, в 1996 и 1999 гг.- в Беларусии, и за период с 1999 по 2001 гг.- в ограниченных районах Украины, несмотря на проведение мероприятий по борьбе с болезнью Тешена, в том числе вакцинации.
14
На территории остальных стран Европы болезнь не регистрируется благодаря проводимым карантинным и другим мероприятиям, как на границе, так и внутри страны, направленным на предупреждение заноса и распространения данного заболевания. На территории Дании, Финляндии, Ирландии, Норвегии и Северной Ирландии введён запрет на проведение вакцинации против болезни Тешена.
Первые сообщения о БТ на территории бывшего СССР были приведены П.Н. Андреевым в 1948 г. Согласно его данным, был установлен факт болезни в Московской области и на территории Киргизии. Однако позже эти сведения не получили официального подтверждения. На территории СССР болезнь Тешена впервые диагностировал В.Ф. Романенко (1971) в Закарпатской области Украины. Официально же на территории СССР болезнь установлена в 1972 г. в Закарпатской области по наличию клинических и патологоанатомических изменений у заболевших свиней. Из этой области в мае 1972 г. во ВННИВВиМ под руководством P.M. Метелёвой выделили патогенный для свиней штамм вируса болезни Тешена, получивший название «Закарпатский» и послуживший основой для отечественной инактивированной вакцины. Вирус изолировали из патологического материала, отобранного в подсобном хозяйстве одной из военных баз г. Ужгорода. Возбудитель, скорее всего, занесли через границу из соседней Чехословакии. В 1971 и 1972 гг. там зарегистрировали соответственно 485 и 239 неблагополучных пунктов по болезни Тешена (Коломыцев A.A., 2001).
В 1973 г. болезнь появилась уже во Львовской и Житомирской, а в 1974 г.-в Винницкой и Киевской областях Украины (Сергеев В.А. и др., 1980). Более ранние сообщения о вспышках БТ, имевшихся в 1969 г. в Житомирской области не нашли документального подтверждения. В 1980 г. очаги болезни установили в Ровенской и Волынской областях. В декабре 1979 - январе 1980 гг. болезнь зарегистрировали в 4 неблагополучных пунктах Краславского района Латвии. Предполагается, что фактором передачи инфекции в районе послужили свиные продукты, используемые в пищу работавшими на
- Київ+380960830922