ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.........................................................5
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ........................................9
1.1. Характеристика большой восковой моли (Galleria mellonella)...9
1.2. Особенности биологии большой восковой моли...................9
1.3. Поражение личинками большой восковой моли пчелиных семей....10
1.4. Существующие меры борьбы с личинками большой восковой моли.... 11
1.4.1. Биопрепараты на основе энтомопатогенных бактерий бациллы
турингиензис.......................................................14
1.4.1.1. Основные биопрепараты против чешуекрылых насекомых........14
ГЛАВА 2. Бацилла турингиензис (Bacillus thurmgiensis)..............18
2.1. Токсины и вторичные метаболиты бациллы турингиензис...........18
2.2. Гидролитические ферменты......................................23
2.2.1. Фосфолипаза С...............................................23
2.2.2. Вегетативный инсектицидный белок Vip3A......................24
2.2.3. Протеолитические ферменты...................................25
2.2.4. Хитиназа....................................................25
2.3. Бактериоцины..................................................26
2.3.1. Бактериоцины грамотрицательных и грамположительных бактерий...27
2.3.2. Свойства бактериоцинов......................................29
2.4. Антиоксидантная система насекомых.............................31
2.4.1. Ферментативные антиоксиданты................................32
2.4.2. Неферментативные антиоксиданты..............................35
2.5. Детоксицирующие ферменты......................................38
2.5.1. Микросомальные монооксигеназы...............................38
2.5.2. Неспецифические эстеразы....................................39
2.5.3. Глутатион-Б-трансферазы.....................................40
2.5.4. Влияние инфекций на активность детоксицирующих ферментов 42
ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ........................................46
3.1. Объекты исследования..........................................46
3
3.2. Получение метаболитов бациллы турингиензис (белковые фракции) из культуральной жидкости................................................46
3.3. Определение pH стабильности белковых фракций.....................47
3.4. Определение бактериостатической активности белковых фракций 47
3.5. Заражение личинок большой восковой моли бациллами турингиензис..47
3.6. Отбор гемолимфы из среднего кишечника личинок большой восковой моли и приготовление гомогената.......................................47
3.7. Определение активности супероксиддисму газы в среднем кишечнике личинок большой восковой моли.........................................48
3.8. Определение активности каталазы в среднем кишечнике личинок большой восковой моли.....................................................48
3.9. Определение активности и спектра неспецифических эстераз в гемолимфе и среднем кишечнике личинок большой восковой моли..................49
3.10. Определение активности глутатион-Б-трансферазы в гемолимфе и среднем кишечнике личинок большой восковой моли.......................50
3.11. Определение тиолсодержащих соединений в гемолимфе и среднем кишечнике личинок большой восковой моли...............................50
3.12. Определение концентрации белка в гемолимфе и среднем кишечнике личинок большой восковой моли.........................................50
3.13. Статистическая обработка экспериментальных данных...............51
ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ..........................52
4.1. Механизм развития инфекции, вызываемой бациллой турингиензис (штамм Р-2), в организме личинок большой восковой моли................52
4.2. Активность и спектр неспецифических эстераз при бактериозе личинок
большой восковой моли.................................................54
ГЛАВА 5. Механизм действия метаболитов (белковые фракции) бациллы
турингиензис (штамм Р-2) на личинок большой восковой моли.............61
5.1. Характеристика метаболитов (белковые фракции) бациллы турингиензис 63
11
1977; Гробов, 1984; Риб, 2006]. Восковая моль причиняет вред также своими выделениями. Фекальные шарики, попавшие на дно ячеек в результате присутствия в них, вероятно, ферментов, нарушают конечную линьку пчел непосредственно перед их выходом. Воздух в сильно пораженном молью улье делается неприятным, и пчелы покидают его. Нередко от восковой моли отмечают гибель семей пчел или их сильное ослабление. В США восковая моль причиняет ущерб на сумму 4-4.5 млн. долларов, в штате Флорида от этого вредителя потери достигают 1 млн. долларов. В Болгарии восковая моль ежегодно разрушает 30 тонн воскового сырья [Гробов, 1984; Риб, 2006].
1.4. Существующие меры борьбы с личинками большой восковой моли
Профилактические мероприятия. На пасеках необходимо содержать сильные пчелиные семьи, на сокращенных гнездах, поддерживать чистоту в ульях и сотохранилищах. Ульи должны быть исправны, и не иметь щелей. Ежегодно следует менять не менее 30 % старых сотов на вновь отстроенные. Не допускается хранение суши внутри ульев. Воскосырье, хорошо утрамбовав и оплавив поверхности, складируют в плотно закрытыеемкости для кратковременного хранения. Соты с кормовым медом или без них хранят в специальных помещениях или в отдельных шкафах (ящиках). При использовании клещеуловителей поддоны очищают через каждые семь-десять дней (сметки сжигают). Вокруг ульев выкапывают небольшие канавки, заполняя их водой, - это предупреждает переползание личинок вредителя от одного улья к другому. Для отпугивания молей в сотохранилища помещают сухую полынь, бессмертник, перечную мяту и листья ореха. На территории пасек выращивают душицу, мяту, полынь, хмель, душистую герань, которые своим специфическим запахом отпугивают взрослых бабочек большой восковой моли. В ульях моль можно собрать на сухие листья черной редьки.
Физические методы борьбы. Для уничтожения моли на всех стадиях
12
развития пораженные соты выдерживают при 49; 50 °С в течение 40-60 мин или промораживают при 10 °С 90-180 мин. Соты с пергой промораживанию не подлежат. Следует предупреждать заплесневение сотов. В летний период сотовые рамки хранят на вешалках на небольшом расстоянии друг от друга в светлых проветриваемых помещениях. Деревянные и металлические части ульевого оборудования тщательно обжигают огнем паяльной лампы, обращая внимание на углы в ульях.
Химические методы борьбы. Для этого широко применяют муравьиную кислоту (концентрация 86,5-99,7 %, ГОСТ 1706-78, марки А и Б, ГОСТ 5848-73). Ее используют для дезинфекции пораженных сотов (плотность загрузки 100 гнездовых сотов на 1 м3, температура 23-28 °С и относительная влажность 65-75%) в дозе 200 г/ м3 при экспозиции четверо суток. Обработка двукратная с интервалом 10-12 суток.
На пасеке дезинсекцию муравьиной кислотой проводят на специально отведенной площадке. В пчелиные улья помещают по 10 рамок с сотами, пораженными вредителями. Пустую полиэтиленовую бытовую крышку ставят сверху на деревянные рейки сотов верхней части пчелиного улья и наливают в нее кислоту из расчета по 14 мл на каждый пчелиный улей (0,13 м3). Верхнюю часть пчелиного улья закрывают крышкой. Сверху ульи накрывают полиамидной пленкой, края которой заправляют в земляной замок. Время обработки - трое-четверо суток при 23-28 °С. Обработка двукратная с интервалом 10-12 дней, затем соты проветривают в течение шести-восьми суток.
Уксусную кислоту (80 %) используют для дезинсекции сотов из расчета 200 мл на один двенадцатирамочный улей по описанной выше методике. Рамки и соты в герметичных корпусах под полиамидной пленкой выдерживают в течение трех суток при температуре окружающего воздуха не менее 16 °С или шести суток - при температуре менее 16 °С. После этого соты проветривают на воздухе не менее 20 ч.
Газом ОКЭБМ (окись этилена, бромистый метил и смесь этих газов)
- Київ+380960830922