Совершенствование системы обеспечения безопасности объектов ветеринарного контроля мегаполиса Москва

СОДЕРЖАНИЕ
2
стр.
ВВЕДЕНИЕ............................................... 4
1 ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР........................................ 11
1.1 Реформа технического регулирования и задачи обеспечения 11
безопасности объектов ветеринарного контроля
1.2 Сравнительный анализ зарубежных и отечественных 15
критериев и методов оценки безопасности и качества продуктов животного и растительного происхождения......
2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.................................. 28
2.1 Методы исследований....................................... 28
2.1.1 Бактериологический метод.................................. 28
2.1.2 Иммунологические методы идентификации микроорганизмов 30
2.1.3 Методы ДНК-диагностики микроорганизмов.................... 30
2.1.4 Методика идентификации патогенов с помощью ДНК-РНК 31
гибридизации на приборе Люмипроб.......................
2.1.5 ДНК-гибридизация с использованием тест-набора с ДНК- 33
зондами, меченными биотином............................
2.1.6 Методика определения видовой принадлежности мяса на 38
основе иммунодиффузии..................................
2.1.7 Методика определения ГМИ на основе ПЦР и 42
электрофоретического детектирования....................
2.1.8 Методика количественного определения ГМИ на основе ПЦР 43
в реальном времени.....................................
2.1.9 Статистическая обработка результатов...................... 46
2.2 Результаты исследований .................................. 46
2.2.1 Совершенствование правовой и нормативной базы 46
ветеринарного контроля в мегаполисе Москва.............
3
51
56
63
70
75
75
79
102
108
116
120
139
Совершенствование научно-методической базы ветеринарнолабораторного контроля в мегаполисе Москва ...............
Совершенствование ветеринарно-лабораторного контроля на
рынках...................................................
Совершенствование ветеринарно-лабораторного контроля в
Московской городской ветеринарной лаборатории.............
Совершенствование ветеринарного лабораторного контроля
микробных контаминаций на основе ДНК-диагностики..........
Разработка системы лабораторного ветеринарного
мониторинга в мегаполисе Москва...........................
Обеспечение эпизоотического благополучия Москвы...........
Обеспечение безопасности продовольствия, находящегося в
обороте на территории Москвы..............................
Мониторинг продукции по количественному определению
ГМИ с помощью ПЦР в реальном времени......................
Обсуждение результатов....................................
Выводы...................................................
Список литературы.........................................
Приложение...............................................
20
При использовании методов ДНК-гибридизации предпочтительнее применение флюоресцентных и калориметрических меток (18-19, 22, 33, 43, 61,72,76,103,106,114,124,136).
Наиболее перспективными в плане практического применения для определения показателей безопасности и качества продукции животноводства являются методы гибридизации нуклеиновых кислот и ПЦР.
Методы генной диагностики используются для идентификации продукции и определения фальсифицирующих примесей, для индикации и идентификации возбудителей инфекций, в геномной «дактилоскопии» (5-6, 18-19, 28, 33,43,45,61,84, 89,96,98, 106, 113, 116, 118, 127, 129, 145, 154-155,157-158,160).
Методы ДНК диагностики и их модификации подробно описаны в различных обзорах (5-6,16, 18,38,40, 80, 84,115-116, 118).
В последнее время разработаны новейшие технологии: ПЦР в реальном времени и ДНК - микрочиповая технология. Технология ПЦР в реальном времени позволяет проводить количественный анализ. ДНК-микрочиповая технология дает возможность анализировать образец одновременно по многим показателям.
За рубежом и у нас в стране ДНК-диагностика с успехом используется при идентификации различной животноводческой продукции, в частности, при определении видовой принадлежности мяса и мясопродуктов. Разработаны тест-системы для определения видовой принадлежности мяса крупного и мелкого рогатого скота, свиней, птицы, кроликов и др., а также для выявления фальсифицирующих примесей. Что особенно важно, показана возможность проведения анализа продукции после термической обработки, например, в колбасах.
Таким образом, иммунологические методы и методы генной диагностики обладают высокой специфичностью, чувствительностью, возможностью проведения качественного и количественного анализа и могут быть использованы в качестве достоверных тестов при ветсанэкспертизе.
21
Гармонизация методов определения показателей безопасности и качества может осуществляться как прямым введением международных методов в национальные стандарты, так и при максимальном приближении национальных стандартов к международным.
При проведении сравнительного анализа зарубежных и отечественных критериев и методов оценки безопасности и качества продуктов животного и растительного происхождения можно сделать вывод, что, наряду с соответствием некоторых показателей безопасности и качества, по многим позициям необходима их гармонизация для защиты потребителей от небезопасных продуктов и фальсификации.
При ветеринарно-санитарной экспертизе особые затруднения в идентификации мяса возникают в тех случаях, когда для исследования имеются в наличии только мелкие кусочки мяса, а не целые туши или четвертины. В этих случаях применяют реакцию преципитации, определение йодного числа жира, показатели рефракции, а также используют методику определения температур вспышки животных жиров при помощи прибора Бренкена (63).
Так, например, известно определение межвидовых различий мышечной ткани животных с помощью метода газовой хроматографии. При этом изучалось содержание углеводородов, циклобутанов и полиненасыщенных жирных кислот. Однако, по мнению ряда авторов, на основании этого пока невозможно осуществлять количественный анализ содержания примесей мяса различного вида в мясопродуктах. Для определения фальсификаций мяса используются биофизические методы изучения спектра поглощения белка.
Анализ видового состава проводили также по идентифицикации видоспецифичных пептидных цепей миозина кур методом электронного парамагнитного резонанса (170). Однако, использование этих методов требует сложного и дорогостоящего оборудования и не применяется в широкой практике.