РАЗДЕЛ 2
ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Решение поставленных задач осуществлялось с помощью экспериментальных, клинических и лабораторных методов исследования.
Общий объем клинико-экспериментальных исследований представлен в табл.2.1.
Таблица 2.1
Объем клинико-экспериментальных исследований.
Объекты исследования
Наименования проведенных
исследований
Количество наблюдений123Клинические исследования
Практически здоровые люди
Клиническое обследование
15Больные с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом
Исследование ротовой жидкости до и после лечения, изучение электрокинетической подвижности ядер буккального эпителия.
25Больные с многоформной экссудативной эритемой
10Больные с эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая
30
Всего:
80
Продолжение табл. 2.1
123Экспериментальные исследованияБелые крысыИзучение безвредности препарата Виталонг, определение его влияния на макро- и микроскопические показатели внутренних органов, состав периферической крови, печеночные пробы, ферментный спектр тканей слизистой оболочки полости рта и больших слюнных желез.38Изучение лечебно-профилактической эффектив-ности "Виталонга" при моделировании заболеваний слизистой оболочки полости рта с помощью гепатита, изучение уровня перекисного окисления липидов, активности гидролитических ферментов в тканях слизистой оболочки полости рта, сыворотки крови.60Изучение лечебно-профилактического действия препарата при моделировании заболеваний слизистой оболочки полости рта с помощью холестаза и изучение уровня перекисного окисления липидов, состояния клеточных мембран, общей протеолитической активности, общей ингибиторной активности, морфологии тканей слизистой оболочки полости рта и печени.70Изучение лечебно-профилактического действия препарата на фоне моделирования лучевой болезни средней тяжести, изучение перекисного окисления липидов, состава периферической крови.61Моделирование травматических язв слизистой оболочки полости рта и изучение сроков их эпителизации.20Изучение специфического действия препарата при моделировании иммобилизационного стресса и изучение активности гидролитических ферментов в тканях слизистой оболочки полости рта и больших слюнных желез.24
Всего:
273 В ходе выполнения клинической части диссертационной работы обследовано 65 больных с эрозивно-язвенными заболеваниями слизистой оболочки полости рта, которые находились на амбулаторном лечении в отделе терапевтической стоматологии Института стоматологии АМН Украины в течение длительного периода и лечились традиционными методами, 15 здоровых людей, составили контрольную группу. Клиническому и лабораторному обследованию были подвергнуты лица мужского и женского пола в возрасте 25-60 лет. Объектом исследования служила слизистая оболочка полости рта, ротовая жидкость, буккальный эпителий слизистой оболочки полости рта.
Обследование больного начиналось со сбора анамнеза, оценки общего состояния организма, детального клинического осмотра слизистой оболочки полости рта и выявления патологических изменений на видимых кожных покровах.
Нестимулированную смешанную слюну у больных с заболеваниями слизистой оболочки полости рта и у людей контрольной группы собирали натощак в 9 часов утра, путем сплевывания в течение 5 минут в центрифужную мерную пробирку. Пробирки хранились в охлажденном состоянии. Полученную слюну фракционировали 15-минутным центрифугированием в рефрижераторной центрифуге РС-6 при температуре +4 °С со скоростью 3000 об/мин. Для биохимического исследования отбирали надосадочную фракцию.
Изучение функциональной активности клеток буккального эпителия производили по методу В.И. Шахбазова и соавт. [149].
Взятие соскоба слизистой оболочки полости рта для определения электрокинетической подвижности ядер клеток буккального слоя эпителия проводилось также утром у всех больных и здоровых людей, так как потенциал этих ядер изменяется в течение суток. Стерильным шпателем путем легких скоблящих движений по внутренней стороне щеки брали клетки эпителия.
Взятый путем соскоба буккальный эпителий переносили на покровное стекло, и с помощью препаровальной иглы распределяли его по поверхности стекла для получения однородного мазка клеток, затем наносили на него одну каплю воды, и покрывали мазок другим покровным стеклом.
Полученный препарат помещали в камеру для внутриклеточного электрофореза. Выводы электродов камеры подключали к прибору для электрофореза, перед подключением камеру закрепляли на предметном столике микроскопа. При малом увеличении микроскопа выбирали поля зрения, удобные для подсчета клеточных ядер, а затем переводили микроскоп на большее увеличение и включали источник питания. Исследования проводили при напряжении 20-30 V и силе тока 0,1±0,01 mA.
Меняя полярность электродов переключением тумблера, нами исследовалась электрокинетическая подвижность ядер буккального эпителия в течение 5 минут. В каждом поле зрения отмечали ядра, которые под действием тока смещались к аноду и неподвижные ядра. В каждом препарате просматривали не менее 100 клеток и определяли процент ядер, смещающихся к аноду. Исследования проводили у больных с заболеванием слизистой оболочки полости рта до лечения и после лечения.
Экспериментальные исследования по изучению эффективности нового комплексного препарата Виталонг были проведены на 273 белых крысах разведения вивария Института стоматологии, у которых воспроизводили 5 моделей заболеваний слизистой оболочки полости рта, а также изучали хроническую токсичность препарата Виталонг.
Моделирование заболевания и его экспериментальная терапия является основным методом для изучения его патогенеза и разработки методов профилактики и лечения.
Изучение хронической токсичности комплексного препарата Виталонг было проведено на белых крысах, которым внутрижелудочно с помощью зонда ежедневно вводили препарат в течение 2-х месяцев. Контрольным животным ежедневно внутрижелудочно вводили фи