ГЛАВА 2
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ НОВОРОЖДЕННЫХ
И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Общая характеристика новорожденных с инфекциями группы TORCH
Для выполнения поставленных задач, в Харьковском городском перинатальном центре, в 2000-2003 г.г., у 140 новорожденных, родившихся с клиническими проявлениями инфекционного процесса, проведена верификация возбудителей. Новорожденные поступали из центра и городских родильных домов в отделение реанимации и интенсивной терапии и в отделение выхаживания недоношенных новорожденных в зависимости от тяжести состояния в момент перевода.
Инфекции группы TORCH верифицированы у 113 (81 ? 3,3 %) новорожденных, которые были включены в группы тщательного клинического и иммунологического исследования. С учетом верифицированных инфекций новорожденные распределены на 3 группы: 1-ая (основная), наиболее многочисленная по отношению к другим группам (p?0,01) - 68 (60 ? 4,6 %) новорожденных с микст-инфекциями; 2-ая (сравнения) - 20 (18 ? 3,6 %) новорожденных с моноинфекциями вирусной этиологии (ЦМВИ, ВПГ I/II типа, вирус краснухи); 3-я (сравнения) - 25 (22 ? 3,9 %) новорожденных с моноинфекциями хламидийной и микоплазменной этиологии.
Среди новорожденных с инфекциями группы TORCH, тяжелое состояние при рождении диагностировано чаще - 73 (65 ? 4,5 %) новорожденных (p?0,01), чем состояние средней степени тяжести - 40 (35 ? 4,5 %) новорожденных. Среди родившихся детей мальчиков - 62 (55 ? 4,7 %), девочек - 51 (45 ? 4,7 %). Средняя масса при рождении - 2,6 ? 0,1 кг. В срок родилось 42 (37 ? 4,5 %) ребенка. Недоношенность I степени диагностирована у 28 (25 ? 4,1 %) новорожденных, недоношенность II степени - у 18 (16 ? 3,4 %) новорожденных, недоношенность III степени - у 25 (22 ? 3,9 %) новорожденных. Гипотрофия I - II степени выявлена у 13 (12 ? 3,1 %) детей. СЗВУР имел место у 25 (22 ? 3,9 %) новорожденных.
Асфиксия средней степени тяжести диагностирована чаще - 78 (69 ? 4,4 %) новорожденный (p?0,01), чем тяжелой степени - 33 (29 ? 4,3 %). В двух наблюдениях имели место роды на дому.
На первые сутки жизни достоверно чаще (p?0,01), госпитализированы 62 (55 ? 4,7 %) новорожденных, чем на 2-е сутки - 14 (12 ? 3,1 %) и на 3-и сутки - 11 (10 ? 2,8 %), а также позже 3-х суток - 26 (23 ? 4,0 %) новорожденных. Также дети, чаще, были госпитализированы в отделение реанимации и интенсивной терапии - 81 (72 ? 4,2 %) ребенок (p?0,01), чем в отделение выхаживания недоношенных новорожденных - 32 (28 ? 4,2 %) новорожденный. Искусственная вентиляция легких проводилась 68 (60 ? 4,6 %) новорожденным с TORCH инфекциями. В отделении реанимации проводилась патогенетическая, седативная терапия, противошоковая, терапия дыхательной недостаточности, дети получали ноотропные и сосудистые препараты. Среднее пребывание в отделении реанимации составило 8,9 ? 7,4 дней.
После стабилизации витальных функций для продолжения патогенетической и ранней реабилитационной терапии дети были переведены в специализированные отделения Харьковского городского перинатального центра, где была продолжена реабилитационная терапия. По окончании острого периода заболевания в возрасте 1 месяца 46 (41 ? 4,6 %) детей не имели отклонений в неврологическом статусе, 39 (34 ? 4,5 %) - имели грубую неврологическую симптоматику, 28 (25 ? 4,1 %) больных умерли.
2.2. Использованные лабораторно-инструментальные методы диагностики инфекций группы TORCH
Оценка состояния здоровья новорожденных проводилась с применением метода клинического наблюдения в раннем неонатальном периоде. Были использованы рутинные методы: клинический анализ крови, ликвора, биохимический анализ крови.
Для уточнения характера и тяжести поражения центральной нервной системы (ЦНС) применялся метод нейросонографии с использованием аппарата "Aloka 550SD" (Япония), датчиками 5,0 и 7,5 МГц.
Для уточнения характера и тяжести поражения сердца применялся метод эхокардиоскопии с использованием аппарата "Aloka 550SD". Для уточнения поражения легких - метод рентгенографии.
Верификация возбудителей осуществлялась полимеразной цепной реакцией с использованием ПЦР - тест-системы АмплиСенс-200 для амплификации участка ДНК (ЦНИИ Эпидемиологии МЗ РФ). Во всех наборах обязательно применялся "горячий стандарт", который обеспечивал разделение смеси нуклеотидов с праймерами и Tag-полимеразы прослойкой воска. Плавление воска и перемешивание реакционных компонентов происходило только при 950С, что значительно снижало количество неспецифических реакций. В готовые пробирки под масло или непосредственно на поверхность масла вносили по 10мкл ДНК-проб, выделенных из клинических или контрольных биологических проб. Затем, на амплификаторе запускали программу. Через 30 секунд после запуска программы, когда температура в ячейке амплификатора достигала 80 - 950С, и программа начинала выполнять паузу, помещали пробирки в ячейки амплификатора, закрывали крышку прибора, убирали паузу и ожидали окончания реакции. После окончания реакции собирали пробирки в специальный штатив и отправляли в комнату для анализа продуктов ПЦР. Анализ продуктов амплификации проводили разделением фрагментов ДНК в агарозном геле.
Метод иммуноферментного анализа проводили на тест-системах "Хема" - № К101 - К105 (ООО "Хема-Медика", Москва) для выявления IgG и IgM антител к инфекциям TORCH и передаваемым половым путем, а также тест-системах ЗАО "Вектор-Бест" - № 64/197/96 . Готовили разведение образцов 1:21 на синем ИФА буфере. В одну из лунок вносили 100 мкл синего ИФА буфера. Затем, в соответствующие лунки вносили по 100 мкл калибратора, контролей и разведенных исследуемых образцов. Планшет оставляли на 30 минут при комнатной температуре (22 - 250С). Содержимое из лунок удаляли. Планшет трижды отмывали, добавляли в лунки по 250 мкл отмывочного раствора и вытряхивали его. В лунки вносили по 100 мкл рабочего раствора анти-IgG-конъюгата. Планшет инкубировали 30 минут при комнатной температуре. Затем, содержимое лунок удаляли. Планшет от